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细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂盒产品说明书

发布时间：2025/9/9 16:47:09 阅读次数：22

细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂盒产品说明书

主要用途
细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂是一种旨在通过特异性 DNA 活性染料特异性地使固着处理的核酸物质立刻染色，呈现点状或杆状的非核 DNA 蓝色荧光的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞培养的支原体定性检测。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，检测敏感，荧光清晰。

技术背景
支原体(mycoplasma)属于柔膜细菌目(Mollicutes)，是最小(0.2至2微米)也是最简单(580至2200kbp) 的寄生类生物。其缺乏肽聚糖(peptidoglycan)细胞壁。支原体是人体非典型型肺炎的病原体。由于支原体具有青霉素和链霉素抗性、无法通过过滤去除，成为细胞培养中常见的污染微生物：改变细胞表型和生长特征。赫斯特染料(Hoechst 33258)为特异性 DNA 活性染料，与 A-T 键结合，这种染料对固着处理的核酸可立即染色。细胞培养污染性支原体荧光染色技术，通过Hoechst 33258DNA染色，替代支原体培养技术，具有快速原位检测细胞培养中支原体的存在，即细胞核外DNA或细胞外DNA的染色阳性，在荧光显微镜下(激发波长360nm，散发波长490nm)下观察到蓝色点状(dots)或杆状(rods)。

产品内容
清理液(Reagent A)    毫升
固着液(Reagent B)    毫升
染色液(Reagent C)    毫升
封片液(Reagent D)    毫升
产品说明书    1 份

保存方式
保存固着液(Reagent B)和染色液(Reagent C)在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃ 冰箱里；固着液(Reagent B)确保瓶盖密闭；染色液(Reagent C)，避免光照，有效保证 6 月

用户自备
微型台式离心机：用于悬浮细胞操作
细胞培养板或培养皿：用于培养细胞的容器
荧光显微镜：用于观察荧光染色情况

实验步骤
一、贴壁细胞培养检测
1．准备好待测细胞培养至 50％铺满率(注意：建议使用无抗生素细胞培养液)
2．小心抽掉细胞培养容器里的培养液
3．轻轻加入适量的清理液(Reagent A) 到每个培养孔里(见下表)
培养容器    容量
96 孔板    毫升
48 孔板    毫升
24 孔板    毫升
12 孔板    毫升
6 孔板    毫升
25cm2    毫升
4．小心抽去清理液
5．小心加入适量的固着液(Reagent B) 到每个培养孔里(见实验步骤 2 表)
6．室温下孵育 10 分钟
7．小心抽去固着液
8．重复实验步骤 5 至 7 一次
9．小心加入适量的染色液(Reagent C) 到每个培养孔里(见下表)
培养容器    容量
96 孔板    微升
48 孔板    微升
24 孔板    微升
12 孔板    毫升
6 孔板    毫升
25cm2    毫升
10．在室温下，暗室里孵育 30 分钟(注意：避免液体蒸发而干枯)
11．小心抽去染色液
12．小心加入适量的清理液(Reagent A) 到每个培养孔里(见实验步骤 2 表)
13．小心抽去净化液
14．小心加入适量的封片液(Reagent D) 到每个培养孔里(见实验步骤 9 表)
15．置于荧光显微镜下观察染色情况(400 至 1000 倍放大倍数)：激发波长 360nm，散发波长 490nm 胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等蓝色荧光

二、悬浮细胞培养检测
1．将待测悬浮细胞(1 X 105 总量)移入到 2 毫升离心管
2．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
3．小心抽去上清液
4．加入XX毫升清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群
5．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
6．小心抽去上清液
7．加入XX毫升固着液(Reagent B)，混匀细胞颗粒群
8．室温下孵育 10 分钟
9．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
10．小心抽去上清液
11．重复实验步骤 7 至 10 一次
12．加入XX毫升染色液(Reagent C)，混匀细胞颗粒群
13．室温下，暗室里孵育 30 分钟
14．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
15．小心抽去上清液
16．加入XX毫升清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群
17．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
18．小心抽去上清液
19．加入XX微升清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群
20．移取 20 微升到载玻片上
21．空气中晾干
22．加入XX微升封片液(Reagent D)
23．封片
24．即刻置于荧光显微镜下观察染色情况(400 至 1000 倍放大倍数)：激发波长 360nm，散发波长 490nm 胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等蓝色荧光

注意事项
1 ．本产品为 20 次(24 孔板)、50 次(48 孔板)、100 次(96 孔板)操作
2 ．操作时须戴手套
3 ．操作时，严格无菌操作
4 ． 3T6 、vero 、L292 细胞为支原体易感性细胞
5 ．建议使用 1 至 3 次无抗生素培养传代的待测细胞
6 ．试剂瓶务必密封保存
7 ．染色液(Reagent C) －20℃低温保存
8 ．染色时，避免光照
9 ．细胞染色前后的清洗过程中，小心操作，以免将细胞冲洗掉
10 ．阳性图像可见蓝色发亮的核染色；标准支原体染色见下图：
11．如果有真菌和细菌污染，可见较大的菌体染色
12．本公司提供系列细胞培养试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号        名称                    规格
G&VS10088.2    细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂盒        20/100 次
G&VS10088.2A    清理液(Reagent A)                100 毫升
G&VS10088.2B    固着液(Reagent B)                100 毫升
G&VS10088.2C    染色液(Reagent C)                100 毫升
G&VS10088.2D    封片液(Reagent D)                100 毫升
G&VS10088.1    细胞培养污染性支原体鉴定 16S－23SrDNAPCR 扩增检测试剂盒    20 次

产品编号        名称                规格
G&VS12049. 1    DMEM 细胞培养基            500 毫升
G&VS12049.2    RPMI 1640 细胞培养基        500 毫升
G&VS12024. 1    胰蛋白酶(0.05%)乙二胺四乙酸混合液    100 毫升
G&VS12024.2    胰蛋白酶(0.25%)乙二胺四乙酸混合液    100 毫升
G&VS12024.3    乙二胺四乙酸(EDTA)细胞脱离溶液    100 毫升
G&VS12028. 1A    Hanks 平衡盐缓冲溶液(HBSS)        500 毫升
G&VS12028. 1B    Hanks 钙镁平衡盐缓冲溶液(HBSS)    500 毫升
G&VS12028.2    10 倍 Hanks 平衡盐缓冲溶液(HBSS)    500 毫升
G&VS12033. 1A    标准磷酸平衡盐(PBS)缓冲溶液        500 毫升
G&VS12033. 1B    钙镁磷酸平衡盐(PBS)缓冲溶液        500 毫升
G&VS12033.2    10 倍磷酸平衡盐(PBS)缓冲溶液(0.1 M)    500 毫升
G&VS12050    青链霉素混合液            100 毫升
G&VS12051    精制胎牛血清            500 毫升
G&VS12063    胚胎干细胞(ES)基础培养基        500 毫升
G&VS12064    小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)完全培养基    500 毫升
G&VS12199. 1    人体胚胎干细胞完全培养基        100 毫升
G&VS12199.2    小鼠胚胎干细胞完全培养基        100 毫升
G&VS12199.3    大鼠胚胎干细胞完全培养基        100 毫升
G&VS10071    滋养细胞法胚胎干细胞繁殖试剂盒    10 次
G&VS10072. 1    明胶法人体胚胎干细胞繁殖试剂盒    10 次
G&VS10072.2    明胶法小鼠胚胎干细胞繁殖试剂盒    10 次
G&VS10072.3    明胶法大鼠胚胎干细胞繁殖试剂盒    10 次
G&VS12110    胰蛋白酶中和液            100 毫升
G&VS10058    细胞培养细菌污染定性荧光检测试剂盒    20 次
G&VS10068    动物肝星状细胞分离培养试剂盒        5 次
G&VS10069    细胞培养病毒污染溶斑法结晶紫染色试剂盒    20 次
G&VS10070    细胞培养病毒污染溶斑法中性红染色试剂盒    20 次
G&VS10088. 1    细胞培养污染性支原体鉴定 16S－23SrDNAPCR 扩增检测试剂盒    20 次
G&VS10088.2    细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂盒    20/100 次
G&VS10089    细胞培养抗支原体污染试剂盒        10 次