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发布时间:2025/9/19 17:00:26 阅读次数:17
氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)浓度比色法定量检测试剂是一种旨在通过葡萄糖-6-磷酸脱氢酶反应系统中,伴随着氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)还原后吸光峰值的变化,即采用比色法测定样品中NADP含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品(动物、人体、植物、昆虫等)氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)的浓度检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景
氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(oxidized nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate;NADP)是一种辅酶,又称氧化型辅酶Ⅱ,在很多生物体内具有分解代谢(catabolic)和生物合成的作用。其还原形式为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate;NADPH),存在于细胞糖类代谢过程中。在哺乳动物体内,NADP,通过葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase;G6PD)的作用,转化为NADPH,成为细胞内主要还原剂,保护活体细胞免受氧化损害。在植物叶绿体内,由铁氧化还原蛋白NADP还原酶(ferredoxin –NADP reductase)的催化,生成NADPH,成为光合作用(卡尔文循环(calvin cycle)的主要还原剂。基于葡萄糖-6-磷酸(D-glucose-6-phosphate)在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase;G6PD)的作用下,转化为6-磷酸葡萄糖酸内脂(6-phosphoglucono-δ-lactone) 产物后,伴随着辅酶因子氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;β-NADP)转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;β-NADPH),产生吸光峰值的变化,在分光光度仪下(340nm 波长),测定NADP的浓度。其反应方式为:
产品内容
缓冲液(Reagent A) 毫升
反应液(Reagent B) 毫升
阴性液(Reagent C) 毫升
酶促液(Reagent D) 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存反应液(Reagent B)和酶促液(Reagent D) 在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月
用户自备
比色皿或酶标板:用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪:用于比色分析
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的反应液(Reagent B)和酶促液(Reagent D)置入冰槽里融化,避免光照。然后进行下列操作。
一、测定准备
1.准备好待测NADP的样品(例如细胞裂解萃取液样品等),置于冰槽里
2.设定好分光光度仪(温度为37℃):波长340nm,并置零
3.缓冲液(Reagent A)室温下均衡温度
二、背景对照测定
1.移取xx微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2.加入xx微升反应液(Reagent B)
3.加入xx微升阴性液(Reagent C)
4.上下倾倒数次,混匀
5.置于37℃温度下孵育3分钟,避免光照
6.即刻放进分光光度仪检测,此为背景0分钟读数
7.加入xx微升酶促液(Reagent D)
8.上下倾倒数次,混匀
9.置于37℃温度下孵育5分钟,避免光照
10.即刻放进分光光度仪检测,此为背景5分钟读数
11.背景实际读数:5分钟读数-0分钟读数
三、样品测定
1.移取xx微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2.加入xx微升反应液(Reagent B)
3.加入100微升(20微克总蛋白)待测样品(注意:样品须清澈)
4.上下倾倒数次,混匀
5.置于37℃温度下孵育3分钟,避免光照
6.即刻放进分光光度仪检测,此为样品0分钟读数
7.加入xx微升酶促液(Reagent D)
8.上下倾倒数次,混匀
9.置于37℃温度下孵育3分钟,避免光照
10.即刻放进分光光度仪检测,此为样品5分钟读数
11.样品实际读数:5分钟读数-0分钟读数
四、计算样品浓度
五、酶标板测定
1.在96孔酶标板上做好相应标记:背景对照和待测样品
2.分别移取xx微升缓冲液(Reagent A)到所有孔中
3.分别加入xx微升反应液(Reagent B)到所有孔中
4.分别加入xx微升阴性液(Reagent C)和待测样品(10微克总蛋白)到对应孔中
5.轻轻摇动酶标板,混匀
6.置于37℃温度下孵育3分钟,避免光照
7.即刻放进酶标仪检测,此为背景或样品0分钟读数
8.分别加入xx微升酶促液(Reagent D)到所有孔中
9.轻轻摇动酶标板,混匀
10.置于37℃温度下孵育5分钟,避免光照
11.即刻放进酶标仪检测,此为背景或样品5分钟读数
12.实际读数:5分钟读数-0分钟读数
13.计算样品浓度
注意事项
1.本产品为25次(比色皿)和100次(酶标板)操作,包括背景对照
2.操作时,避免污染母液
3.操作时,须戴手套
4.系统操作过程中,背景测定只需1次
5.样品须澄清,至关重要
6.孵育时,避免光照
7.加样后即刻比色测定
8.反应1分钟后比色测定值趋于稳定;测定值由低到高变化;测定持续5分钟
9.比色测定后,比色皿须清洗彻底
10.如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度
11.本公司提供系列生化检测试剂产品
质量标准
1.本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 名称 规格
G&VS10090 NADP浓度比色法定量检测试剂盒 20/80次
G&VS10090A 缓冲液(Reagent A) 100毫升
G&VS10090B 反应液(Reagent B) 10毫升
G&VS10090C 阴性液(Reagent C) 10毫升
G&VS10090D 酶促液(Reagent D) 1毫升
产品编号 名称 规格
G&VS50005 NADH浓度比色法定量检测试剂盒 20/80次
G&VS50124 NAD浓度比色法定量检测试剂盒 20/80次
G&VS50067 NADPH浓度比色法定量检测试剂盒 20/80次
G&VS10090 NADP浓度比色法定量检测试剂盒 20/80次
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