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发布时间:2025/9/25 18:54:20 阅读次数:16
CAT#:JW-20-73230
低温运输,-20℃保存
十足目虹彩病毒1型探针法LAMP试剂盒(含内参)
产品及特点
十足目虹彩病毒1型(Decapod Iridescent Virus 1,DIV1),又叫虾虹彩病毒,是近几年来威胁罗氏沼虾养殖产业的重要病害之一,可感染南美白对虾、罗氏沼虾、红螯螯虾等虾类,且具有不同的外观症状。其中,在罗氏沼虾上,最为典型的特征是额剑基部甲壳出现一块白色三角形区域,称为“白点”,部分虾有空肠空胃、肝胰腺萎缩等症状。在水产研究所长期性病原监测的过程中发现,虾虹彩病毒携带率较高,具有感染性强、致死率高的特点,且呈现出逐年增长的趋势。因此对十足目虹彩病毒1型的快速准确鉴定有重要意义。本公司根据独自开发的探针法LMAP技术,开发了简单快捷的十足目虹彩病毒1型探针法LAMP检测试剂盒,它具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供DNA样品。
2.恒温扩增,反应设置更加简单。
3.含荧光探针,可以对扩增进行实时荧光检测(需要荧光PCR仪)。
4.检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
5.特异性高,根据十足目虹彩病毒1型保守序列设计的4条特异引物和1条探针,不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
6.一般30分钟内出结果,比PCR快。
7.上样量大,对20 mL的反应体系,最大样品加样量高达到14 mL。
8.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9.提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。
10.提供内参,便于排除假阴性结果。
11.本产品只能用于定性分析,不推荐用于定量分析。
12.本产品足够50次20 mL体系的探针法LAMP扩增。
13.本产品只可用于科研。
规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份 编号 规格 包装
4×LAMP MasterMix
(探针法,待加酶) 220303 200 mL 0.5 mL绿盖管
Bst DNA聚合酶2.0 11-220319 50 mL 0.5 mL红盖管
20×十足目虹彩病毒1型探针法LAMP引物-探针混合干粉 yp20-73230 50 mL 0.5 mL棕色管
十足目虹彩病毒1型LAMP阳性对照(1×10E4拷贝/mL) pc20-73230 250 mL 0.5 mL黄盖管
十足目虹彩病毒1型LAMP内参对照(1×10E4拷贝/mL) Ic20-73230 250 mL 0.5 mL紫盖管
使用手册 20-73230sc 1份 无
注意:引物探针混合干粉在使用前需要短暂离心,然后在离心管中加入55 mL的超纯水充分混匀和再使用,未用完的需要-20℃保存。
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。
自备试剂
样品DNA,超纯水
使用方法
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品DNA,本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容,包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品,则需要做N+2个样品制备,包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10 mL本试剂盒提供的样品阳性对照(1×10E4拷贝/mL)和10 mL内参阳性对照(1×10E4拷贝/mL)加一定量的水作为核酸提取阳性对照样品,加水后的总体积必须跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用10 mL本试剂盒提供的10 mL内参阳性对照(1×10E4拷贝/mL)加一定量的水充当,加水后的总体积必须跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。
二、探针法LAMP反应(20 mL体系)
3.反应设置:如果有N+2个DNA纯化样品,则最好设置N+4个LAMP扩增,增加的两个反应分别是LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照。首次使用本试剂盒时,需要将Bst DNA聚合酶2.0全部加入到4×LAMP MasterMix(探针法,待加酶)中,轻柔颠倒混匀1分钟后再使用。未用完的部分需要放-20℃保存。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:
成分 N+2个样品管 LAMP阴性对照 LAMP阳性对照
4×LAMP MasterMix
(探针法,加酶后) 各5uL 5 uL 5 uL
20×十足目虹彩病毒1型
LAMP引物-探针混合液 各1 uL 1 uL 1 uL
N+2个样品DNA 各14 uL - -
超纯水 - 14 uL -
十足目虹彩病毒1型LAMP阳性对照(1×10E4拷贝/mL) 3.5 uL
十足目虹彩病毒1型LAMP内参对照(1×10E4拷贝/mL) - - 3.5 uL
4.如果使用荧光定量PCR仪,则设置60次循环,每次65℃保温1分钟,采集FAM通道和HEX通道的荧光信号。
三、结果分析
5.实验有效性的判断:样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的FAM信号(对应样本)和HEX信号(对应内参)必须有标准的S扩增曲线,样品制备阴性对照的HEX信号(对应内参)必须有标准的S扩增曲线,LAMP阴性对照的FAM信号和HEX信号必须呈现一条平线,没有S曲线,否则提取实验或扩增实验无效。如果上述阳性对照和阴性对照结果正常,则实验有效,可以分析样品的情况。
6.待测样品的结果判断:在实验有效的情况下,才有必要分析代测样品管的荧光信号。如果其FAM荧光信号曲线为S型(无论HEX信号如何),则说明样品为阳性。如果FAM荧光信号为平线则说明待测样品为阴性。如果HEX荧光信号为S曲线,说明代测样品(FAM曲线)为真阴性。如果HEX荧光信号也是平线,说明此样品可能是假阴性,此样品需要重复测试。
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