关于商城

商城指南

支付方式

配送方式

售后服务

细胞β-内酰胺酶报告基因活性荧光检测试剂盒产品说明书

发布时间：2025/9/26 13:46:11 阅读次数：15

细胞β-内酰胺酶报告基因活性荧光检测试剂盒产品说明书

主要用途
细胞β-内酰胺酶报告基因活性荧光检测试剂是一种旨在通过透膜荧光共振能量转移性底物，在 β-内酰胺酶的水解下，产生绿色和蓝色荧光的交换，来分析细胞内β-内酰胺酶活性，藉此建立一种简单的评价报告基因的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。其适用于转基因后的活体细胞外源性β-内酰胺酶活性的实时分析。产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作简便，检测敏感，具有高通量的特点。

技术背景
β-内酰胺酶(β-lactamase；EC3.5.2.6) 属于细菌酶蛋白家属的成员之一， 29KD 单体蛋白(monomeric)。大量细菌分泌产生，分布在细菌周边和细菌细胞浆内，通过水解酰胺键( amide bond)，分解β-内酰胺     (β-lactam)的 4 原子环状结构，由此产生抗菌素，例如青霉素类、头孢菌素类(cephalosporins)、头霉素类(cephamycins)、碳青霉素烯类(Carbapenems)抗性。β -内酰胺酶功能上分成 4 大组，结构上分成 4 大类。 β- 内酰胺酶催化反应敏感有效，且容易测试。因此 β- 内酰胺酶成为崭新的报告基因，替代传统的β- 半乳糖苷酶报告基因系统，可以在活体细胞内实时监测基因转录、检测蛋白间相互作用、评价基因表达载体转染的效果。香豆素头孢菌素荧光素乙氧基甲酯(coumarin cephalosporin fluorescein，acetoxymethyl ester； CCF2/AM)，一种完全自由通过细胞膜，并在细胞浆内长期滞留而不易外漏的非极性头孢菌素类荧光共振能量转移性(fluorescence resonance energy transfer；FRET)底物。一旦受到 β- 内酰胺酶的催化水解，其分子间的供体香豆素(coumarin)和受体荧光素(fluorescin)的荧光共振能量转移结构解体，导致 CCF2 中绿色荧光(激发波长 409nm，散发波长 520nm)的消失，蓝色荧光(激发波长 409nm，散发波长 447nm) 显著增强。据此测定细胞内 β- 内酰胺酶的活性，并建立一种简单的定量或定性评价报告基因所显示的效果。

产品内容
染色液(Reagent A)          微升
稀释液(Reagent B)          毫升
清理液(Reagent C)          毫升
产品说明书                    1 份

保存方式
保存在－20C冰箱里，避免反复冻融；染色液(Reagent A) 避免光照；有效保证 6 月

用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离
完全细胞培养液(G&VS12052)：用于细胞脱落收集
15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5 毫升离心管：用于样品染色的容器
(微型)台式离心机：用于样品操作
培养箱：用于染色孵育
(共聚焦)荧光显微镜：用于活体细胞荧光定性分析
比色皿或 96 孔板：用于荧光定量分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于活体细胞荧光定量分析
细胞流式仪：用于活体细胞荧光分析

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent A) 置入冰槽里融化，稀释液(Reagent B) 室温下预热。然后移出 xx 微升稀释液(Reagent B) 到新的 xx 毫升离心
管，加入 xx 微升染色液(Reagent A)，混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

一、直接法
1．准备 1 个 48 孔细胞培养板的待测细胞(2 X 104细胞)，每孔铺满率达 70％
2．确保细胞培养液达 200 微升
3．加入 xx 微升含有染色液(Reagent A) 和稀释液(Reagent B) 的染色工作液
4．轻轻摇动培养板，混匀
5．室温下孵育 60 分钟，注意避光
6．小心抽去含有染色工作液的培养液
7．小心加入 xx 微升清理液(Reagent C) (注意：检测前置于冰槽里)
8．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察(单滤波或双滤波)：
观察蓝色荧光：滤波器激发波长 395nm，散发波长 460nm ――可见亮蓝色荧光；如果强度显著增强，表明β- 内酰胺酶的活性增强
观察绿色荧光：滤波器激发波长 395nm，散发波长 530nm ――如果绿色荧光强度显著减弱，表明β- 内酰胺酶的活性增强

二、间接法
1 ．准备 1 个 12 孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达 70％(约 30 万细胞数)
2 ．小心移出细胞培养液到 15 毫升锥形离心管
3 ．加入 xx 毫升清理液(Reagent C) 到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4 ．小心抽去清理液(Reagent C)
5 ．加入 xx 微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面
6 ．放进 37℃培养箱孵育 1 分种
7 ．轻轻抖动培养板，使细胞脱落，然后加入 xx 毫升用户自备的完全细胞培养液
8 ．移入到 15 毫升锥形离心管
9 ．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g
10．小心抽去上清液
11．加入 xx 微升用户自备的完全细胞培养液
12．用 200 微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群
13．转入到 1.5 毫升离心管
14．加入 xx 微升含有染色液(Reagent A) 和稀释液(Reagent B) 的染色工作液
15．轻度涡旋震荡 2 秒
16．室温下孵育 60 分钟，注意避光
17．放入台式微型离心机离心 5 分钟，速度为 300g
18．小心抽去上清液
19．加入 xx 微升清理液(Reagent C) (注意：检测前置于冰槽里)

选择一、(共聚焦)荧光显微镜观察
1．混匀后，移出 50 微升在载玻片上
2．即刻进行载玻片压片，在荧光显微镜下进行观察(单滤波或双滤波)：
观察蓝色荧光：滤波器激发波长 395nm，散发波长 460nm ――可见亮蓝色荧光；如果强度显著增强，表明β- 内酰胺酶的活性增强
观察绿色荧光：滤波器激发波长 395nm，散发波长 530nm ――如果绿色荧光强度显著减弱，表明β- 内酰胺酶的活性增强

选择二、细胞流式仪分析
1.     混匀后，即刻进行细胞流式仪双通道分析：观察 50000 个细胞以上
激发波长                        350nm    350nm
荧光颜色                        绿色          蓝色
散发波长                        530              460
流式仪通道    FL3    FL4
荧光增强    β- 内酰胺酶阴性    β- 内酰胺酶阳性

选择三、荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定
1．混匀后，移出 xx 微升到黑色 96 孔板里或 100 微升比色皿里
2．即刻进行荧光分光光度仪 96 孔酶标仪或比色皿测定(单一测定或双重测定)：

单一测定：     激发波长395nm，散发波长460nm，获得相对荧光单位(RFU) ——RFU值高表明β- 内酰胺
酶活性高
激发波长395nm，散发波长460nm，获得蓝色荧光单位
激发波长 395nm，散发波长 530nm，获得绿色荧光单位――蓝色荧光单位除以绿色荧光单位最终获得荧光比值：比值高表明β- 内酰胺酶活性高

注意事项
1 ．本产品为 20 次(0.2 毫升体系)操作
2 ．操作时，须戴手套
3 ．建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析
4 ．孵育时，避免光照
5 ．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿， 35mm 培养皿，和各种培养孔板，须相应调整操作用量：
操作容器              体系容量
载玻片              100 微升
载玻片培养皿    1 毫升
35mm 培养皿    1 毫升
96 孔培养板    100 微升
48 孔培养板    200 微升
24 孔培养板    500 微升
12 孔培养板    1 毫升
6 孔培养板              2 毫升
25cm2细胞培养瓶    3 毫升

6 ．根据细胞类型，调整染色工作液使用剂量(1：10 至 1 ：100 容量比)，避免过度染色
7 ．建议采用双滤波或双重测定： β- 内酰胺酶阳性细胞呈现蓝色；阴性细胞呈现绿色
8 ．蓝色荧光与绿色荧光单位的荧光比值：大于 2 为高度阳性； 1 至 2 为中度阳性； 0 至 1 为低度阳性
9 ．本公司提供 β- 内酰胺酶抑制剂溶液(clavulanic acid；G&VS12041)，观察细胞荧光变化现象
10．用户可以使用激发波长 340 至 410nm、散发波长 410 至 510nm (蓝光) 或 495 至 575nm (绿光)之间的任一波长替代
11 ．β- 内酰胺酶细胞流式仪检测参考图像如下：

坐标位置    荧光颜色    意义
左上象限    蓝色荧光    β- 内酰胺酶阳性
右上象限    蓝绿荧光    阴性和阳性共存
坐下象限    绿色荧光    β- 内酰胺酶阴性
右下象限    无荧光    死亡细胞

12．本公司提供系列报告基因检测试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号                         名称                                                                规格
G&VS10093. 1    细胞β-内酰胺酶报告基因活性荧光检测试剂盒    20 次
G&VS10093. 1A    染色液(Reagent A)                                            1 毫升
G&VS10093. 1B    稀释液(Reagent B)                                            10 毫升
G&VS10093. 1C    清理液(Reagent C)                                            100 毫升
G&VS12024    胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液                        500 毫升
G&VS12052    DMEM 完全细胞培养液                        500 毫升
试剂盒订购信息
产品编号              名称                                                                          规格
G&VS10093. 1    细胞β-内酰胺酶报告基因活性荧光检测试剂盒    20 次
G&VS10093.2    组织β-内酰胺酶报告基因活性荧光检测试剂盒    20 次
G&VS10093.3    细菌β-内酰胺酶报告基因活性荧光检测试剂盒    20 次
G&VS10093.4    酵母β-内酰胺酶报告基因活性荧光检测试剂盒    20 次
G&VS10183. 1    细胞β-内酰胺酶报告基因活性生物发光法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10183.2    组织β-内酰胺酶报告基因活性生物发光法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10183.3    细菌β-内酰胺酶报告基因活性生物发光法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10183.4    酵母β-内酰胺酶报告基因活性生物发光法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10186. 1    细胞β-内酰胺酶报告基因活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10186.2    组织β-内酰胺酶报告基因活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10186.3    细菌β-内酰胺酶报告基因活性比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10186.4    酵母β-内酰胺酶报告基因活性比色法定量检测试剂盒    20 次