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石蜡包埋切片RNA纯化试剂盒（沉淀法）

发布时间：2025/9/28 10:20:01 阅读次数：9

CAT#:JW-220617-30
常温运输和保存（有两成分需要-20℃保存）

石蜡包埋切片RNA纯化试剂盒（沉淀法）

产品及特点
石蜡包埋切片是珍贵的分子生物学研究材料，但是其保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行RT-PCR的RNA样本，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门开发的、用于从石蜡包埋切片中快提RNA的试剂，具有下列特点：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2.适用于甲醛固定和非甲醛固定的两类切片。
3.含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。
4.沉淀法，比过柱法和磁珠法能更好的回收高度降解的RNA片段。
5.能有效去除基因组DNA的污染，避免DNA的干扰。
6.得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。
7.本产品足够30次微量提取，每次可以处理5片切片。
8.本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品用小扁盒包装，但蛋白裂解液需要塑料袋包装，低温运输
成份                                                编号    规格   包装材料
石蜡包埋切片RNA纯化溶液A    220617a    30mL    30mL本色瓶
石蜡包埋切片RNA纯化溶液B    220617b    3mL   5mL本色瓶
蛋白裂解液                               220617c   5mL   5mL本色瓶
蛋白去除剂（RNA专用）       220617d    15mL    15mL棕玻瓶
微量核酸沉淀剂                       220313   30mL    30mL本色瓶
RNase-free水                      980403      1mL    1.5mL黄色管
使用手册                   220617sc    1份   无

运输及保存
常温运输和保存，但蛋白裂解液、RNase-free水，-20℃保存。有效期一年。

自备试剂
75%乙醇。

使用方法
1.将5片厚度为6-8μm的石蜡包埋切片转移到1.5mL塑料离心管(最好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL石蜡包埋切片RNA纯化溶液A，在振荡器上以最大速度振荡10秒。
2.加入75μL石蜡包埋切片RNA纯化溶液B，在振荡器上以最大速度振荡10秒。
3.7000×g室温离心2分钟，溶液将形成上下两个相，其中组织切片位于下层。
4.小心吸弃上层液体。
5.将离心管放入真空离心机中抽干下层的液体，一般需要一小时。
6.加入150μL蛋白裂解液，55℃保温过夜。
7.短暂离心，95℃保温10分钟。
8.加入0.5mL蛋白去除剂（RNA专用），充分震荡半分钟。
9.13000-15000×g室温离心3-5分钟。
10.将无色上清液（约0.6mL）转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相（蓝色）和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的DNA。
11.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡30秒混匀。
12.14000g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。
13.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
14.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇，振荡混匀30秒。
15.14000g室温离心1分钟。
16.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
17.短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
18.室温放1-2分钟后立即加入50μL RNase-free水使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。样品立即使用或存放于-80℃待用。
19.RNA完整性的电泳检测：
20.RNA产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
21.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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