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谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）活性测定试剂盒说明书

发布时间：2025/9/28 14:53:28 阅读次数：21

货号：JWSH1111 规格：50管/48样
谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）活性测定试剂盒说明书
紫外分光光度法

产品内容：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5.0 mL 蒸馏水，混匀。
试剂三：液体×1 支，4℃保存。

产品说明：
GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中GR 被 TrxR 取代)。GR 催化NADPH 还原 GSSG 生成 GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外 GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时不断消耗NADPH生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340nm吸光度下降速率；来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。

自备仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500-1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声超声破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、GR 测定操作：
1.分光光计预热 30 min 以上，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于 25℃(普通物质)或者37℃(哺乳动物)中预热30min以上。
3.空白管：取1mL 石英比色皿，加入850µL 试剂一，100µL 试剂二，50µL 试剂三，充分混匀，于340nm 处测定10 s和190 s 吸光度，记为 A空1和A空2，△A空白管= A 空1﹣A 空2。
4.测定管：取1mL 石英比色皿，加入750µL 试剂一，100µL 试剂二， 100µL 上清液，50µL 试剂三，充分混匀，于340nm 处测定 10 s 和 190 s 吸光度，记为 A 测1 和 A 测2，△A 测定管= A测1﹣A测2。
注意：空白管只需要测定一次。

三、GR 活性计算：
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义：在一定温度中， pH8.0 条件下，每毫克蛋白每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。GR 酶活(U/mg prot)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(Cpr×V样)÷T
=0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义：在一定温度中， pH8.0 条件下，每克样本每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。
GR 酶活(U/g)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(W×V样÷V 样总)÷T
=0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义：在一定温度中，pH8.0 条件下，每 104个细胞每分钟催化 1µmol NADPH 氧化。
GR 酶活(U/104 cell)= [ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106] ÷(细胞数量×V样÷V 样总)÷T=0.536×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量
ε：NADPH 摩尔消光系数 6.22×103L/mol/cm；V 反总：反应体系总体，1000µL=0.001 L；106：1 mol=1×106µmol；Cpr：上清液蛋白浓度（ mg/mL）；V 样：加入反应体系中上清液体积，100µL =0.1 mL；V样总：加入提取液体积ˈ 1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3 min。

注意事项：
1.样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融；
2.试剂二须现配现用，配置完后，置于冰上；
3.测定前须先用 1～2 个样做预实验，确保180s 内吸光值变化呈线性，哺乳动物组织一般须用试剂一稀释 2～5 倍；
4.细胞中GR 活性测定时，细胞数目须在 300 万-500 万之间，细胞中 GR 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。