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DNA片段加A试剂盒

发布时间：2025/10/9 14:08:45 阅读次数：1

CAT#:JW-220703-50
低温运输，-20℃保存

DNA片段加A试剂盒

产品及特点
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。本产品有下列特点：
1.简单，2×加A MasterMix中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。
3.产物可以直接用于与T载体的连接。
4.本产品足够50次加A反应。
5.本产品只能用于科研。

规格及成分
   成份                                编号          规格   包装
2×加A MasterMix           220703           1 mL    2mL本色管
使用手册                        220703sc      1份           无
本产品使用塑料袋包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
PCR片段、超纯水

使用方法
一：反应前纯化处理：
用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K处理），否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1 ug/uL为宜。

二：加A反应
在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入回收的DNA片段(0.2-2 ug)，25 uL 2×加A MasterMix，补水到50 uL后72℃保温2小时

三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于T载体的连接反应。

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