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发布时间：2025/10/9 14:18:22 阅读次数：7
CAT#:JW-220727-200
低温运输，-20℃保存
单细胞RT-PCR试剂盒
产品及特点
单细胞是非常重要的实验材料，但是由于单细胞中的RNA很少，一个人体细胞只有6pg的基因组DNA，一个小鼠胚胎干细胞只有2万多个mRNA分子，一个小鼠成纤维细胞只有50万个mRNA分子。因此单个细胞根本没法用来进行核酸纯化。为了克服次缺点，本公司开发了单细胞RT-PCR试剂盒，它具有下列特点：
1.直接用1-500个细胞进行RT-PCR，免去RNA纯化过程中不可避免的RNA丢失。
2.本产品采用RT和PCR分离的两步法设置，方便用户用珍贵的cDNA样本进行更多靶基因的PCR检测。
3.所含RNA保护剂可有效抑制RNA的降解。
4.所含保护剂能有效克服痕量RNA因非特异性吸附产品的丢失。
5.RT所得的cDNA可以用户后续染料法PCR和探针法PCR检测。本产品只包括染料法PCR试剂。
6.本产品足够进行200次5uL体系的单细胞裂解、200次10uL体系的逆转录、200次10uL体系的染料法qPCR实验。
7.本产品只能用于科研。
规格及成分
成份 编号 规格 包装材料
单细胞裂解液（RNA专用） 220107 1mL 1.5mL本色盖
5×单细胞RT Buffer A 220725a 400uL 0.5mL白盖管
5×单细胞RT Buffer B 220725b 400uL 0.5mL绿盖管
单细胞专用MMLV 220725c 100uL 0.5mL红盖管
2×染料法qPCR MasterMix 990408 1mL 1.5mL黄盖管
使用手册 220727sc 1份 无
本产品使用五孔盒包装
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂
制备单细胞所需试剂，靶基因专一的PCR引物（不能扩增基因组DNA）
使用方法
1.用户需要根据样本细胞种类选用合适的方法（如胰酶消化）制备单细胞悬液，对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如卵细胞），则可以跳过此步。本试剂盒不含相关试剂。
2.将5uL单细胞裂解液（RNA专用）预先分装到0.2mL PCR管中或96孔板中，分装的管数根据样品数决定。
3.用流式细胞仪或在倒置显微镜下用液压显微操作器将1-500个细胞转移到上步所得的、预装了裂解液的PCR管或96孔板中。
4.细胞进入裂解液后，裂解即发生。细胞裂解后在常温最多只能放5小时。如果不需要立即使用，必须将样品放-80℃长期保存。细胞裂解液可以反复冻融最多5次。
5.如果立即使用，则在裂解样品中加入2uL 5×单细胞RT Buffer A。
6.65℃保温5分钟后立即放冰上。
7.加入2uL 5×单细胞RT Buffer B。
8.加入1uL 单细胞专用MMLV，轻柔吹打混匀，总体积为10uL。
9.在PCR仪上按下列参数进行逆转录反应：25℃保温5分钟，50℃保温60分钟，55℃保温15分钟，70℃保温15分钟。
10.所得cDNA可以直接用于后续PCR，也可以放-20℃长期保存。
11.加入50uL自备超纯水到10uL cDNA中稀释cDNA。
12.取3uL上步所得cDNA稀释液作为PCR模板，加入浓度为4uM的自备PCR引物各1uL，加入5uL 2×染料法PCR Mix，总体积为10uL。
13.根据选定的PCR程序进行染料法qPCR并进行溶解曲线分析。
14.如果用户需要用cDNA进行探针法PCR检测，需要自备相关试剂。
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