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发布时间:2025/10/9 14:21:41 阅读次数:12
CAT#:JW-220802
常温运输和保存
外泌体DNA-RNA纯化试剂盒(沉淀法)
产品及特点
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡 (40-100 nm),主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关其分泌、摄取、组成、“运载物”及其相应功能的精确分子机制的研究还处于起步阶段。但从外泌体提取核酸(主要是RNA)非常棘手,为此本公司开发了外泌体核酸(DNA和RNA)纯化试剂。本产品具有下列特点:
1.一管式操作,在同一试管中完成,减少样品丢失。
2.沉淀法,不使用离心柱,能有效避免小RNA的丢失。
3.能同时提取RNA(包括RNA和miRNA)和DNA。
4.回收率达到90%以上,高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
5.无毒环保,不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
6.本产品只能用于科研,不能。用于临床
规格及成分
成份 编号 规格 包装材料
外泌体DNA-RNA纯化溶液A 220802a 30 mL 30 mL本色瓶
外泌体DNA-RNA纯化溶液B 220802b 35 mL 60 mL本色瓶
外泌体DNA-RNA纯化溶液C 220802c 50 mL 60 mL本色瓶
RNase-free水 980403 1 mL 1.5 mL本色管
使用手册 220802sc 1份 1份
本产品使用小扁盒包装
运输及保存
常温运输保存,但外泌体核酸提取溶液A长期保存需要放4℃。有效期一年。
自备试剂
外泌体。
使用方法
一、制备外泌体(本试剂盒不提供相关试剂)
注意:自备的外泌体需要立即使用或放-80℃长期保存。用于核酸提取的外泌体可以是沉淀,也可以是重悬液。
二、外泌体核酸提取
1.从冰箱取出外泌体DNA-RNA纯化溶液A,放室温或握在手上融化,直到没有任何晶体,再充分摇匀待用。
2.标记1.5-2 mL螺旋盖塑料离心管。为避免污染,建议不要使用压盖式塑料离心管。最好在每个管盖上做个标记,以在下步离心时有意将标记方向朝向心面或离心面。
3.将不超过200 μL的外泌体重悬液加入到标记好的塑料离心管中。
4.每管中加入600 μL外泌体DNA-RNA纯化溶液A,盖上盖子后振荡数秒混匀。
5.室温放置3分钟。
6.加入0.7 mL外泌体DNA-RNA纯化溶液B,旋紧盖后振荡30秒混匀。
7.14,000×g室温离心至少15分钟。注意:离心时如果把标记固定朝向心面或离心面,则在后面的操作均得按此朝向进行离心。
8.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的核酸沉淀(此时可能看不见)。
9.加入1.0 mL 外泌体DNA-RNA纯化溶液C, 振荡数秒.
10.14,000×g室温离心5分钟。
注意:离心管标记的朝向要跟上面的一致。
11.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的核酸沉淀(可能在离心管内壁的离心面呈膜状)。
12.再短暂离心数秒, 用移液器移弃残留液体(约50 μL)。
13.加入200 μL RNase-free水,用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状沉淀。如果溶液稍呈混浊状属于正常。
注意:所得溶液即为外泌体核酸溶液。如果只需要RNA,必须去除DNA,则另外用自备的RNase-free DNase对DNA污染进行降解。反之如果只需要DNA,必须去除RNA,则另外用自备的DNase-free RNase对RNA污染进行降解。
14.直接取适量用于后续实验。样品可以室温放置2小时,也可保存于-80℃保存一个月。
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