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单细胞裂解液（DNA专用）

发布时间：2025/10/11 9:22:17 阅读次数：11

CAT#:JW-220623-1
低温运输，-20℃保存

单细胞裂解液（DNA专用）

产品及特点
单细胞裂解液（DNA专用）是单细胞DNA检测专用裂解液，它具有下列特点：
1.快速裂解单个细胞。
2.可有效抑制DNase在裂解过程中对DNA的破坏，维持DNA的稳定性。
3.裂解物可以直接用于测序和PCR等后续试验。
4.本产品足够至少200次单细胞裂解实验。
5.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                          编号    规格     包装
单细胞裂解液（DNA专用）      220623      1 mL 1.5 mL本色管
使用手册                                   220623sc    1份       无
本产品使用塑料袋包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
待处理样品，液体细胞培养基，PBS溶液，胚胎裂解液（可从本公司另购）

使用方法
如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备，此处所列步骤仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球（2-8细胞胚胎）等材料，对其他材料（如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等），用户需自行选用合适的方法制备单细胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如FACS分离细胞、卵细胞等），则可以跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤：
一、用培养细胞或实体组织制备单细胞：
1.按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基中。
2.按常规方法对细胞进行计数。
3.转移100-4000个细胞到新离心管中，400 g离心4分钟沉淀细胞，小心弃上清（培养基）。
4.将细胞沉淀重悬于50 mL自备PBS溶液中，使其终浓度为2-80个细胞/mL。
5.在干净的培养皿上点加数个含5 mL的PBS溶液小液滴，加入5 mL细胞悬浮液到第一个小液滴中，然后再从第一个小液滴中转移5 mL到第二个小液滴，如此系列稀释样品数次，使得其浓度接近每2.5 mL液体中含1个细胞，放冰上待用。

二、用卵裂球（blastomere，2-8细胞胚胎）制备单个细胞：
6.在培养皿中点数个含5 mL胚胎裂解液（需要从本公司另购）的小液滴。
7.显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。
8.转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。
9.在最后一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。
10.取单个细胞，转移到数个含5 mL PBS溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。
11.在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的2.5 mL样品并转移到一个200mL的PCR管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5 mL样品中不含细胞）。

三、用单细胞裂解液裂解细胞
12.在显微镜下用显微注射仪取2.5 mL样品，确认含一个细胞后，将其转移到一个含2.5 mL单细胞裂解液的PCR管中。最好同时设置无样品的阴性对照（2.5 mL样品中不含细胞）。
13.在2.5 mL样品中，显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。
14.裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。
四、单细胞裂解物的PCR扩增
15.细胞裂解物从-80℃中取出后，65℃保温10分钟，取出后放冰上待用。
16.以一半或全部上步操作得到的细胞裂解物为模板，按常规方法进行PCR反应。

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