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乙酸-尿素-PAGE电泳试剂盒

发布时间：2025/10/13 13:51:30 阅读次数：6

CAT#:JW-220954-30
常温运输和保存
但有三个低温成分

乙酸-尿素-PAGE电泳试剂盒

产品及特点
常见的SDS-PAGE电泳不适用于分离碱性蛋白，分离碱性蛋白只能使用乙酸-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Acetic Acid-Urea-PAGE，AU-PAGE，乙酸-尿素-PAGE）。但是传统的AU-PAGE分辨率较较低，并且单独配制各种溶液十分繁琐。为了解决此问题，本公司对传统的AU-PAGE进行了改良，并开发了本产品。它具有下列特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2.采用不连续胶系统，分辨率高，能有效分离只有一个修饰基团不同的组蛋白。
3.使用光引发剂，故不需要进行长时间的预电泳。
4.使用含示踪染料的上样液和电泳液，便于判断样本泳动距离。
5.适用于分离等电点偏碱性的各种碱性蛋白，如嗜中性defensin防御素、tyrosinase酪氨酸酶、protamine鱼精蛋白、histone组蛋白以及这些碱性蛋白的各种修饰形式（如乙酰化、泛素化、磷酸化、甲基化等）。
6.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
7.本产品足够30次0.1cm×14cm×14cm大小的AU-PAGE。
8.本产品只能用于科研。

规格及成分
下列成分用大纸盒包装，常温运输
成份                               编号          规格            包装
丙烯酰胺干粉          79-06-1    150g         250 mL棕色瓶
甲叉双丙烯酰胺干粉     5-475        2.5g         100 mL本色瓶
乙酸                               64-19-7        250mL    250mL本色瓶
AU-PAGE电泳缓冲液    220954a   250 mL    120 mL本色瓶
TEMED                      110-18-9        10 mL      10 mL本色瓶
氨水                             1336-21-6    10 mL      10 mL本色瓶
尿素                        57-13-6         500g         500g干粉瓶
pH指示剂                      220954b   1mL        1.5mL棕色管
使用手册                   220954sc   1份               无

下列成分塑料袋包装，低温运输
成份                              编号       规格        包装
光激发剂                     220954c    10mL    10 mL棕色瓶
上样液成分1              220954d    1g      1.5 mL白盖管
AU-PAGE电泳示踪剂    220954e    1mL     1.5 mL棕色管

运输及保存
常温运输和保存，但光激发剂需塑料袋包装的三个低温成分需要低温运输，-20℃保存。有效期一年

自备试剂
去离子水、透析袋（去除样本中的盐离子用）

使用方法
注意：第一次使用本产品时需先配制各种母液
一：试剂准备工作
1.60%丙烯酰胺母液：将加水到250mL（注意：不是加水250mL），充分摇晃溶解（不能加热）。一次没用完的本溶液可以放4℃长期保存。
2.2.5%甲叉双丙烯酰胺母液：加水到100mL，充分摇晃溶解（不能加热）。一次没用完的可以放4℃长期保存。
3.8M尿素母液：用本试剂盒提供的尿素干粉和自备的去离子水配制8M的尿素母液。如果配制10mL，则将4.8g尿素溶于少量水中，最后定容到10mL。没用完的需要转入塑料瓶，放-20℃保存，避免产生氰酸根离子。

二：样本准备工作
4.待电泳的蛋白样本必须没有离子，故最好先用3500Da截留的透析袋在2.5%乙酸溶液中充分透析，然后分装成5-50ug/管，冷冻抽干。也可以用三氯乙酸沉淀，丙酮洗涤去盐离子。本试剂盒不提供相关试剂。
三：胶的配制（整个过程在常温操作，不能在低温操作）
5.下表是配制0.1cm×14cm×14cm大小的PAGE胶所需各成分的用量。由于常见的碱性蛋白组蛋白和鱼精蛋白分子量都比较小，因此选用4%的浓缩胶浓度和15%的分离胶浓度。如果配制其他规格的胶或者分离其他分子量的碱性蛋白，所配制的体积和胶的浓度需要相应调整。在两个容器中分别加入下列成分:
成分                                15%分离胶    4%浓缩胶
60%丙烯酰胺溶液              8.6mL        0.67mL
2.5%甲叉双丙烯酰胺溶液    1.4mL        0.64mL
乙酸                                    2.1mL         0.57mL
尿素                                   16.8g            4.8g
加去离子水到                 加到33mL        加到9.3mL
6.灌分离胶：按上表配制分离胶，将溶液摇晃混匀，然后用真空泵接上管子抽真空15分钟去除溶液中的氧气，然后加入0.125mL 氨水、0.175mL TEMED和2.38mL光引发剂，迅速摇匀并灌胶，在分离胶的液面距离胶板顶部5 cm的时候，停止灌胶。加入1mL去离子水。由于分离胶比重较大，水将覆盖分离胶并使得胶面平整。将胶板放在强光下（如看X光片的灯箱前）促进光引发剂活动。室温聚合30-60分钟。凝固后倒出水，插入梳子。
7.灌浓缩胶：按上表配制分离胶，将溶液摇晃混匀，然后用真空泵接上管子抽真空15分钟去除溶液中的氧气，加入0.07mL 氨水、0.05mL TEMED和0.65mL光引发剂，迅速摇匀并灌胶。将胶板放在明亮处，促进光引发剂活动。室温聚合30-60分钟。浓缩胶的高度有1cm-2cm即可。
四：电泳（整个过程在常温操作，不能在低温操作）
8.在等待胶凝固的过程中，配制上样液：在1.5mL塑料离心管中，加入7.7mg 上样液成分1，0.9mL 8M尿素母液，50uL pH指示剂，50uL氨水。混匀后待用。没有用完的不需要保留。
9.将待电泳样本冷冻干燥，每管中加入新鲜配制的上样液，室温溶解5分钟。为避免修饰，不要超过5分钟。如果加入样本后，溶液不是红色，则需要补加乙酸，直到颜色变成红色。
10.上样前再补加2.5uL乙酸，2uL AU-PAGE电泳示踪剂。
11.浓缩胶凝固后，拔出梳子，取出胶下面的隔条，将胶板上架到电泳槽上。在下槽加入AU-PAGE电泳缓冲液。
12.上样，每个加样孔上样50uL（2-50ug蛋白质），没有样本的孔也要加入50uL上样液以平衡盐离子浓度。
13.小心在上槽加满新鲜配制的AU-PAGE电泳液。加入了AU-PAGE电泳液后的凝胶必须立即使用，不得放置。
14.接上电源线。注意AU-PAGE的电泳方法跟SDS-PAGE相反，正级需要接到上槽，负级需要接到下槽。碱性蛋白在本电泳体系中将带正电，向负极移动。
15.固定电压到300V电泳，如果是小的胶，可以固定电压到250V电泳。在电泳过程中电流将逐渐降低。整个过程在常温操作，不能在低温操作。
16.当电泳示踪剂快到胶的边缘时停止电泳。
17.对AU-PAGE胶进行考染：将5g考马斯亮蓝R-250溶解在500mL脱色液（20%甲醛，7%乙酸）中，如果有不溶解的颗粒可以过滤去除，放入AU-PAGE后摇晃1小时。然后在脱色液（20%甲醛，7%乙酸）中脱色直到调条带显现。本试剂盒不含考染相关试剂。注意：常见的碱性蛋白Histone和鱼精蛋白分子量都比较小，非常容易在固定时从PAGE中扩散丢失，因此需要按上述方法直接染色，免去固定步骤。

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