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SDS-PAGE电泳试剂盒

发布时间：2025/10/13 13:59:05 阅读次数：8

CAT#:JW-220959-30
常温运输和保存
但有一个低温成分

SDS-PAGE电泳试剂盒

产品及特点
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为了解决此问题，本公司开发了本产品。它具有下列特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2.安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。
3.灵活，用于可以用30%的丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺母液，自行配制各种浓度的PAGE胶，满足分离不同大小蛋白质的需求。
4.使用含染料的改良浓缩胶缓冲液，浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。
5.电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
下列成分用大纸盒包装，常温运输
成份                                                            编号            规格       包装
丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺干粉（19:1）    220959a    57g+3g    250 mL棕色瓶
4×分离胶缓冲液                                        5-475   200 mL    250 mL本色瓶
4×改良浓缩胶缓冲液                                 230323    100 mL   120 mL本色瓶
TEMED                                                   110-18-9    1.5 mL   2 mL白盖管
过硫酸铵                                                   100879       1 g          1.5 mL白盖管
SDS-PAGE电泳液干粉                              220996      368g   250 mL本色瓶
使用手册                                                   220959sc    1份       无

下列成分塑料袋包装，低温运输
成份                                编号        规格        包装
5×SDS-PAGE上样液    220624    1 mL    1.5 mL白盖管

运输及保存
常温运输和保存，但5×SDS-PAGE上样液需低温运输，-20℃保存。有效期一年

自备试剂
去离子水

使用方法
注意：第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液（30% AB溶液，下同）
1.在本产品提供的装有57g丙烯酰胺/3g甲叉双丙烯酰胺干粉的瓶中加入 146 mL自备的去离子水，充分摇晃10-20分钟即得200 mL 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液（以下简称30%AB溶液）。丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例在19:1时，PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。配好的30% AB溶液最好4℃避光保存并在1月内用完。
2.根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表:
蛋白质大小范围(kD)    最佳浓缩胶浓度    最佳分离胶浓度
15-45                            4%                         15%
15-60                          4%                         12.5%
18-7                            4%                         10%
30-120                          4%                         7.5%
60-200                          不需要                    5%
注：如果上样体积少于 10uL，可以不需要浓缩胶。
3.配制10%的APS（过硫酸铵）：称0.1克过APS干粉到1 mL去离子水中，摇晃溶解。没用完的10%APS溶液需4℃存放，一周后就不能再用。
4.配制分离胶溶液：在一个25 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%的AB溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10 mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。
分离胶浓度    用量（单位：mL）
                水   30%AB 溶液        4×分离胶缓冲液
5%       5.83        1.67                    2.50
6%         5.50        2.00                  2.50
7%   5.17       2.33                     2.50
7.5%      5.00       2.50                 2.50
8%       4.83       2.67                  2.50
9%       4.50       3.00                  2.50
10%       4.17       3.33                  2.50
11%       3.83        3.67                  2.50
12%       3.50        4.00                 2.50
13%       3.17       4.33                 2.50
14%       2.83       4.67                 2.50
15%        2.50      5.00                   2.50
16%       2.17       5.33                 2.50
5.配制浓缩胶溶液（一般使用4%的浓度）：在一个25 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%AB 溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10 mL 4%浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
浓缩胶浓度    用量（单位：mL）
              水               30%AB 溶液    4×改良浓缩胶缓冲液
4%             6.17               1.33                   2.50
6.将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应，胶凝固时间会更长）。
7.各加入50 uL 10%APS和40 uL TEMED（这是配制10 mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀。
8.先灌分离胶，在分离胶的液面距离顶部1.5 cm的时候，停止灌胶。
9.由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的交接面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。也可以等分离胶在室温聚合30-60分钟，胶凝固后再灌制。
10.拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2L去离子水中即得10×SDS-PAGE电泳液（测pH应该在8.3，如果不是8.3务必用NaOH或HCl调到8.3），用时再用去离子水稀释成1×工作液。
11.将凝胶板固定在电泳装置上，往上下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。
12.在待电泳的蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4uL样品中加1uL上样液)，100℃煮沸3-5分钟。短暂离心，取上清上样。
13.先用 10 mA 的电流电泳（对0.75 mm厚×14 cm×14 cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
14.将电流增加到 15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的染色等实验处理。

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