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易错滚环扩增试剂盒（Bst法）

发布时间：2025/10/13 14:01:40 阅读次数：7

CAT#:JW-221006-50
低温运输，-20℃保存

易错滚环扩增试剂盒（Bst法）

产品及特点
Bst法易错RCA（Error-Prone Rolling Circle Amplification）是利用Bst DNA多聚酶在一定条件下（如不同的dNTP浓度、不同的Mg浓度和MnCl2存在时）能够按较高的机率引入随机引入突变。Bst法易错RCA弥补了phi29法易错RCA的巨大缺陷，其中一个缺陷是易错PCR没法使用短的DNA片段，因为PCR引物就占了40个bp左右，故不适合小片段DNA突变。但任何短链DNA经过环化后，均可进行易错RCA，故易错RCA可以对短的DNA片段进行突变。环状DNA模板易错RCA示意图如下：

本公司基于上述原理，精心开发了本产品，它具有下列特点：
1.即开即用，十分简单方便，用户不需要辛苦摸索条件。
2.Bst DNA聚合酶保真性弱于phi29 DNA聚合酶，故突变率比phi29法易错RCA更高，一般能产生5-8个突变/kb。如果需要更高的突变率，只需把上一次Bst法易错RCA的产物用作下一次易错RCA的模板即可。
3.反应温度比phi29法易错RCA更高，故可以使用一对或多对靶分子专一性引物进行RCA，提高反应的专一性。
4.不需要进行预变性，可以直接在65℃进行扩增。
5.靶分子DNA既可以是长度只有几十bp的小片段DNA，如启动子，适配子，酶活性区，核糖体结合区等，也可以是质粒，BAC，YAC或全基因组。只是短的DNA需要预先环化。
6.本试剂盒不含突变短的DNA所需要的环化试剂。
7.试剂含有荧光染料，可以实时检测反应情况，随时终止。也避免电泳，节约珍贵的扩增产物。
8.扩增产物可以直接用于酵母转化和培养细胞转染。
9.RCA属于恒温扩增，只需要水浴或金属浴，不需要贵重的PCR仪器。
10.本产品足够50次20uL体系的易错RCA反应。
11.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                        编号      规格        包装
4×易错RCA预混液              221006a    250 uL    0.5mL绿盖管
易错RCA专用DNA聚合酶    221006b    25 uL 0.5mL红盖管
易错RCA引物干粉               221006c    50次       0.5mL黄盖管
易错RCA专用MnCl2            221006d    50 uL   0.5mL白盖管
超纯水                               210806   1mL       0.5mL蓝盖管
使用手册                           221006sc    1份      无
本产品使用五孔盒包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存, 有效期为一年。

自备试剂
环状DNA模板、超纯水。

使用方法
1.首次使用本试剂盒时，需要在装易错RCA引物干粉的黄盖管中加入55uL的自备超纯水，吹打混匀后短暂离心，放冰上待用。没有用完的引物需要放-20℃保存。
2.设置20uL体系的易错RCA反应。以下以一个样为例，每个样本最好设置两个浓度，每次实验设置一个无模板阴性对照：
成分                                 浓度1     浓度2    阴性对照
4×易错PCR 预混液             5 uL     5 uL       5 uL
易错RCA引物                  1 uL     1 uL   1 uL
易错RCA专用MnCl2          1 uL     1 uL   1 uL
环状DNA模板               1ng      50ng      不加
补自备超纯水到                    19 uL    19 uL    19 uL
易错RCA专用DNA聚合酶    1 uL   1 uL      1uL
3.65℃保温24小时，每10分钟设置为一个循环，在SYBR通道采集荧光信号。
4.实时检查易错RCA荧光信号，在两种情况下可以立即终止实验，不一定要等24小时结束。一是两个浓度模板中任何一个的荧光信号进入S型平台期，二是无模板阴性对照的荧光信号正好要爬升而样品的荧光信号已经爬升，此时可终止实验，将样本的扩增产物进行后续处理。
5.扩增结束后，对有扩增信号的样品，按常规操作进行DNA回收，再限制性内切酶酶切验证。如果得到预期大小的片段，则胶回收DNA，再进行克隆和测序等后续操作。
6.易错RCA的扩增产品可以用水稀释10倍后，再进行全基因组扩增，得到更多的DNA，然后再进行酶切，胶回收，克隆等后续操作。

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