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染料法实时RCA试剂盒

发布时间：2025/10/20 11:11:04 阅读次数：101

CAT#:JW-221080-50
低温运输，-20℃保存

染料法实时RCA试剂盒

产品及特点
RCA（Rolling Circle Amplification，滚环扩增）是利用phi29 DNA聚合酶的超长合成能力，在一定条件下（如随机引物、dNTP、Mg离子存在时）能够以线状的超长基因组DNA或环化后的短DNA为模板进行全基因组扩增的技术。本产品是基于RCA技术，针对环状DNA为模板专门开发的RCA试剂盒。其示意图如下：

本产品具有下列特点：
1.即开即用，十分简单方便，用户不需要辛苦摸索条件。
2.直接使用纯化的环状单链DNA或环状双链DNA为模板。如果样本为线状DNA，需要预先对其进行环化（本公司有单链DNA环化和双链DNA环化试剂盒）。
3.RCA属于恒温扩增，操作简单，但如果要实时监测，需要荧光定量PCR仪器。如果没有，也可以电泳检测或PCR检测扩增效果。
4.含荧光染料，可以实时监测RCA反应过程，不需要跑电泳检测，节约宝贵样品（因为进行RCA扩增的样品都非常珍贵）。
5.实时检测使得反应可以在平台期后就可以结束，避免phi29 DNA聚合酶具有的强3-5外切酶活性降解已经合成的DNA。
6.phi29 DNA聚合酶具有的强3-5外切酶活性，故扩增具有高保真性。
7.可以将模板DNA在几个小时到十几小时内扩增万倍左右。
8.本产品足够50次10uL体系的荧光染料实时RCA反应。
9.得到的DNA可以直接用于测序、酶切或PCR等后续实验。
本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                                             编号            规格            包装
4×染料法实时RCA Mix（无酶无引物）    221080a        125 uL    0.5mL绿盖管
RCA专用随机引物溶液                      220225           100 uL    0.5mL白盖管
phi29 DNA聚合酶，10U/uL                  11-K221198   25 uL      0.5mL本色管
使用手册                                      221080sc        1份           无
本产品使用五孔盒包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存,有效期为一年。

自备试剂
环状单链DNA模板或环状双链DNA模板、超纯水。

使用方法
1.按下表设置10uL的环状DNA RCA反应：
成分                                   管1（样本）    管2（无模板对照）
环状DNA，100pg                1 uL                -
超纯水                                     4 uL              5 uL
RCA专用随机引物溶液          2 uL                2 uL
4×染料法实时RCA Mix
（无酶无引物）                      2.5 uL         2.5 uL
在PCR仪器上95℃ 1分钟，30分钟内温度缓慢降到25℃
缓慢降低有利于引物与模板复性
phi29 DNA聚合酶，10U/uL    0.5 uL      0.5 uL
合计                                        10 uL         10 uL
2.放荧光定量PCR仪器上，设置30℃保温16小时，每10分钟设置成一个循环，采集一次SYBR通道的荧光信号。由于是可以实时检测反应，所以反应不一定要在设置时间到达后结束，可以在扩增曲线进入平台期后（已经没有新的DNA合成）结束。因为phi29 DNA聚合酶有很强的3-5外切酶活性，在聚合反应停止后，它可能会进入酶切模式，逐渐降解已经合成的DNA。
3.65℃保温10分钟灭活酶。由于phi29 DNA聚合酶有很强的3-5外切酶活性，因此必须灭活，否则它将逐渐降解已经合成的DNA。
4.典型实验结果。有扩增的样本将有平缓的S荧光曲线，无模板对照将没有此标准扩增曲线（见下图）或扩增曲线：

5.如果没有荧光定量PCR仪器，则只能电泳检测或PCR检测是否有扩增。
6.扩增所得DNA可以用于后续实验。

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RCA专用随机引物