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土壤RNA纯化试剂盒（过柱法）

发布时间：2025/11/18 14:23:26 阅读次数：54

CAT#:JW-221222-50
常温运输和保存

土壤RNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
由于土壤中有机质含量丰富，尤其是其中的腐殖酸对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从土壤微生物提取高纯度的 RNA一直是十分棘手的问题。本产品具有下列特点：
1.处理一个样品只需要约十几分钟。
2.去污染效果好，RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右。
3.得到的RNA可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。
4.性价比高于进口的土壤 RNA 提取产品。
5.试剂无毒无害, 环保。
6.可以进行无氯仿操作，只是纯度稍微降低，但不影响使用。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                编号         规格           包装
土壤RNA纯化溶液A    221222a     55 mL    60mL棕色瓶
土壤RNA纯化溶液 B    221222b    18 mL    30mL本色瓶
土壤RNA纯化溶液 C    221222c    27mL    30mL本色瓶
土壤RNA纯化溶液 D    221222d    30 mL    30mL本色瓶
离心吸附柱                    211207      50套       塑料袋
通用洗柱液                    220143     50 mL    60mL本色瓶
RNA洗脱液                    971207    10 mL    10mL本色瓶
使用手册                        221222sc    1份    无
本产品使用大纸盒包装

运输及保存
常温运输和保存，溶液A 需要放4℃长期保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿，RNase-free 收集管。

使用方法
1.称取 0.1-0.5 g 的土壤，加入 1 mL 土壤RNA纯化溶液A，震荡器上剧烈震荡 5-10分钟。注意:一定要让管底的土壤震荡起来。注意：溶解土壤RNA纯化溶液A沉淀。土壤RNA纯化溶液A在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2.稍微静置后将上清液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中。
3.在离心管中加入 0.3 mL 的溶液B 和 0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡 30 秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温 12000 rpm 离心 3-5 分钟。
5.将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下 100 μL 上清液不取。
6.在上清液中加入 0.5 mL 的溶液 C 和 0.2 mL 的自备氯仿，用手上下颠倒或振荡器振荡 30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
7.室温 12000 rpm 离心 3 分钟，两相间将有白色膜状物（蛋白质）形成。
8.将上清液（约 1 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
9.在上清液中加入 0.5 倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡 30 秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
10.将一半的溶液转移到离心吸附柱中，套入收集管中厚 12000 rpm 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11.将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，套入收集管中后 12000 rpm 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
12.加 0.5 mL 洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
13.加 0.5mL 洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。此步可以省略。
14.将离心吸附柱套入收集管中后室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。 15 可选步骤：（膜上消化 DNA）
15.将 5Ul 的 RNase-free DNase 加入到 45ul DNase buffer 中混匀，加入到离心吸附柱中，室温放置 5-15 分钟（如果后续电泳检测DNA 污染没消化干净，可加大 DNase 的用量和室温放置时间延长）。
16.直接在离心吸附柱中加 0.5ml 的去酶液，盖上盖后颠倒混匀。
17.室温 12000 g 离心 1 分钟，弃穿透液。
18.再加 0.5ml 的去酶液，12000 g 室温离心 1 分钟，弃穿透液。
19.室温 12000 g 离心 2 分钟，此步非常重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
20.将离心吸附柱套入到一个自备的 RNase-free 收集管中，加入 30-100 μL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。
21.12000 rpm 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

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