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线状DNA清除剂（酶法）

发布时间：2025/11/18 14:33:50 阅读次数：55

CAT#:JW-221182-50
低温运输，-20℃保存

线状DNA清除剂（酶法）

产品及特点
分离纯化环状DNA（质粒DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA和某些病毒DNA）的时候经常需要去除其中的线状DNA污染，而保留共价闭合环状DNA和带nick切口和gap缺口的环状DNA。本公产品就是为满足此需求而开发，它有下列特点：
1.即开即用，不需用户花费大量时间去摸索各种条件。
2.酶法去除线性DNA，专一性强，可以使线状DNA污染降级几个数量级，不会干扰后续试验。
3.不降解有nick和gap的环状DNA，包括质粒DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA、环状病毒DNA。
4.处理不依赖于DNA序列，可降解任何线状DNA。而内切酶去除线状DNA则需要预先确知其在环状DNA上没有酶切位点。
5.得到的环状DNA可用于多种后续试验，尤其是WGA、PCR和测序等对污染敏感的试验。
6.本产品足够30 mL体系使用50次。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成分                                        编号        规格        包装
线状DNA清除剂溶液A        221182a    100 mL    0.5 mL绿盖管
线状DNA清除剂溶液B        221182b    30 mL   0.5 mL红盖管
微量核酸沉淀剂                    220313    1.8 mL    2 mL白盖管
使用手册                            221182sc    1份           无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
超纯水，75%乙醇

使用方法
1.在干净塑料离心管中，按下表加入各成分（30 mL体系）：
成份                                        样品        阳性对照        阴性对照
DNA（1-2 mg）        自备样品DNA    自备环状DNA    自备线状DNA
线状DNA清除剂溶液A        3 mL        3 mL                   3 mL
线状DNA清除剂溶液B        1 mL        1 mL                  1 mL
自备超纯水              补到30 mL        补到30 mL        补到30 mL
2.在PCR仪器上37℃保温16小时。如果使用水浴或者金属浴，则需要在管中加入200 mL自备石蜡油以防止水分蒸发。注意：保温时间过短可能会形成短的DNA片段，影响后续反应，所以最好保温16小时。
3.65℃加热10分钟灭活相关酶。
4.反应液可以直接用于后续的测序和PCR检测。如果需要纯化，则将30 mL酶反应溶液转移到一个新的1.5 mL离心管中，再加入60 mL微量核酸沉淀剂。如果没有使用石蜡油，则直接在30 mL酶反应溶液中加入60 mL微量核酸沉淀剂。注意：微量核酸沉淀剂有沉淀，取用前需要充分摇匀。
5.室温15000 g离心10分钟。
6.弃上清后加自备的75%乙醇1 mL，振荡混匀。
7.15000 g离心3分钟，弃上清。
8.再短暂离心后小心吸弃上清，沉淀即为回收的去除掉线状DNA之后的DNA沉淀（含共价闭合环状DNA和带nick和gap的环状DNA），可溶于自备超纯水中后直接使用或放-20℃冰箱长期保存。

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