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填充法双链DNA 3末端生物素标记试剂盒

发布时间：2025/11/19 13:35:22 阅读次数：60

CAT#:JW-230750
低温运输、-20℃保存

填充法双链DNA 3末端生物素标记试剂盒

产品及特点
本产品是基于填充法（Fill-in）的双链DNA 3端标记试剂盒，其原理是Klenow DNA聚合酶以5端突出的DNA为模板，在修补DNA 3端的时候掺入标记了生物素的核苷酸到新合成的DNA中，从而得到生物素标记DNA探针。其原理示意图如下：

本产品具有下列特点：
1.提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2.使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解，探针产量更高。
3.快速，最快25分钟即可完成标记反应。
4.每次标记反应至少需要100ng（0.1g）模板DNA。模板DNA必须是线状的、5端突出的双链DNA，不能是平末端或3端突出的双链DNA。
5.掺入标记核苷酸的数量精准，适用于某些特殊的实验。但得到的探针比活不如随机引物法或PCR法制备的探针，因为掺入的标记核苷酸少。
6.本产品足够30次20L体系的填入法标记实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用五孔盒包装
成份                                                                    编号        规格       包装
5×Fill-in标记反应液(含生物素标记的dNTP)    220314a    120 L    0.5mL绿盖管
Klenow exo- DNA聚合酶                                220314b    30 L    0.5mL红盖管
超纯水                                                            210806    1 mL    1.5mL本色管
使用手册                                                        230750sc    1份      无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
需要自备标记的核苷酸。

使用方法
1.按下表设置反应：
成分                                                               用量
线性 DNA（水溶液）                                       0.1-4 mg
5×Fill-in标记反应液(含生物素标记的dNTP)   4 mL
Klenow exo- DNA聚合酶                                   1 mL
加超纯水                                                            至20 mL
总容积                                                               20 mL
2.37℃孵育 15分钟
3.75℃下加热10分钟灭活Klenow exo-DNA聚合酶。
4.所得的标记DNA可以用于各种后续分析。

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