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裂谷热病毒荧光染料法RT-LAMP试剂盒

发布时间：2025/11/26 9:22:24 阅读次数：2

CAT#:JW-18-76400
低温运输，-20℃保存

裂谷热病毒荧光染料法RT-LAMP试剂盒

产品及特点
裂谷热病毒（Rift Valley fever virus，RVFV）属于布尼亚病毒目白纤病毒科白蛉病毒属的单链 RNA 病毒，与汉坦病毒和克里米亚-刚果出血热病毒是近属。经蚊虫传播，可感染动物和人。RVFV可引起反刍动物流产，而且患病幼崽死亡率近100%，历史上RVFV曾对畜牧业造成多次重创。人感染后通常出现发热、头痛、出血、休克等症状，严重者甚至死亡。因此RVFV的快速准确鉴定有重要意义，为此本公司根据染料法RT-LMAP技术，开发了简单快捷的裂谷热病毒RT-LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供病毒RNA样品。
2.含荧光染料，可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
3.检测灵敏性一般比RT-PCR高10倍以上，分析灵敏度可以达到100拷贝/反应左右。
4.特异性高，根据裂谷热病毒RNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
5.一般30分钟内出结果，比RT-PCR快。
6.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
7.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
8.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到13μL。
9.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
10.本产品足够50次20 μL体系的荧光染料法RT-LAMP扩增。
11.只可用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                                                                   编号                      规格          包装材料
RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶）           211210a                     200μL   0.5 mL本色盖
逆转录酶-扩增酶混合液                                              211208b                      100μL    0.5 mL红盖管
20×裂谷热病毒RT-LAMP引物混合液                        yw18-76400                50μL    0.5 mL白盖管
裂谷热病毒RT-LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    pc76400-AJ005963    250μL     0.5 mL黄盖管
超纯水                                                                      210806                        1 mL       1.5 mL蓝盖管
使用手册                                                                  18-76400sc                  1份          无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂
待测样品。

使用方法
一、样品RNA的制备
1.用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水充当，总体积必须核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样，NC用水替代。

二、RT-LAMP反应（20μL体系）
3.注意：第一次使用一个新的试剂盒时，必须先将100uL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶）中，盖上盖子后轻柔颠倒1分钟混匀，然后再取用。
4.反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则最好设置N+4个RT-LAMP扩增，增加RT-LAMP阴性对照和RT-LAMP阳性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分                                                                   N+2个样品管    RT-LAMP阴性对照    RT-LAMP阳性对照
RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶）      各6 μL               6 μL                      6 μL
20×裂谷热病毒RT-LAMP引物混合液             各1 μL               1 μL                      1 μL
N+2个样品RNA                                               各13 μL                -                               -
超纯水                                                                  -                       13 μL                              -
谷热病毒RT-LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    -                      -                                     13 μL
5.本产品必须使用荧光PCR仪器进行扩增。设置60次循环，每次循环65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。

三、结果分析
6.电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，而本产品是染料法荧光RT-LAML，完全可以不需要电泳检测，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使因为特殊情况使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL RT-LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。RT-LAMP阳性对照必须有正常RT-LAMP条带（200bp左右的梯形扩增产物），RT-LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果RT-LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：

7.荧光分析：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和RT-LAMP阴性对照将呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，有Ct值，则说明样品为阳性，如果为平线，没有Ct值，则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。

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