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诺如病毒G2型荧光染料法RT-LAMP试剂盒

发布时间：2025/11/27 11:33:02 阅读次数：8

CAT#:JW-18-24820
低温运输，-20℃保存

诺如病毒G2型荧光染料法RT-LAMP试剂盒

产品及特点
诺如病毒（Norwalk Viruses，NoV)）是一种单股正链RNA病毒，基因组全长约7500~7700 nt。诺如病毒具有遗传多样性，早期的分类是根据衣壳蛋白的全长序列将其分为5个基因群（GI-GV），其中诺如病毒G2型主要感染人类。诺如病毒G2型感染导致严重腹泻，引起急性肠胃炎。诺如病毒G2型的传播严重威胁人类健康，带来巨大经济损失。因此诺如病毒G2型的快速准确鉴定有重要意义，为此本公司根据染料法RT-LMAP技术，开发了简单快捷的诺如病毒RT-LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供病毒RNA样品。
2.含荧光染料，可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
3.检测灵敏性一般比RT-PCR高10倍以上，分析灵敏度可以达到100拷贝/反应左右。
4.特异性高，根据诺如病毒G2型RNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
5.一般30分钟内出结果，比RT-PCR快。
6.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
7.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
8.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到13μL。
9.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
10.本产品足够50次20 μL体系的荧光染料法RT-LAMP扩增。
11.只可用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                                                       编号          规格        包装
RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶）    211210a    200 μL    0.5 mL本色盖
逆转录酶-扩增酶混合液                                       211208b    100 μL    0.5 mL红盖管
20×诺如病毒G2型RT-LAMP引物干粉            yw18-24820    50 次      0.5 mL白盖管
诺如病毒G2型阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    pc24820       250 μL    0.5 mL黄盖管
超纯水                                                                210806       1 mL      1.5 mL蓝盖管
使用手册                                                        18-24820sc 1份           无
注意：引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入55μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备物品
待测样品RNA。

使用方法
一、样品RNA的制备
1.用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水充当，总体积必须核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样，NC用水替代。

二、RT-LAMP反应（20μL体系）
3.注意：第一次使用一个新的试剂盒时，必须先将100uL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶）中，盖上盖子后轻柔颠倒1分钟混匀，然后再取用。
4.反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则最好设置N+4个RT-LAMP扩增，增加RT-LAMP阴性对照和RT-LAMP阳性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分                                                                N+2个样品管    RT-LAMP阴性对照    RT-LAMP阳性对照
RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶）    各6 μL                 6 μL                      6 μL
20×诺如病毒G2型RT-LAMP引物混合液           各1 μL                1 μL                       1 μL
N+2个样品RNA                                                  各13 μL               -                               -
超纯水                                                                      -                      13 μL                        -
诺如病毒G2型阳性对照（1×10E4拷贝/μL）          -                       -                            13 μL
5.本产品必须使用荧光PCR仪器进行扩增。设置60次循环，每次循环65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。

三、结果分析
6.电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，而本产品是染料法荧光RT-LAML，完全可以不需要电泳检测，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使因为特殊情况使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL RT-LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。RT-LAMP阳性对照必须有正常RT-LAMP条带（200bp左右的梯形扩增产物），RT-LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果RT-LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：

7.荧光分析：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和RT-LAMP阴性对照将呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，有Ct值，则说明样品为阳性，如果为平线，没有Ct值，则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。

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