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创伤弧菌荧光染料法LAMP试剂盒

发布时间：2025/11/27 11:36:23 阅读次数：8

CAT#:JW-18-14880
低温运输，-20℃保存

创伤弧菌荧光染料法LAMP试剂盒

产品及特点
创伤弧菌(Vibrio Vulnificus)是一种存在于海产品（如虾、鱼、牡蛎和蛤蜊等）中的革兰氏阴性嗜盐性细菌，它广泛布于全球河口、海洋和沿海环境中。该菌于1976年在美国首次确认，是美国因食用海产品而致死病例的首要病因，每年有40多个报告的死亡病例。世界范围内许多沿海国家都报道了因创伤弧菌感染而导致急性肠胃炎、原发性败血症，或经伤口感染引起的蜂窝组织炎等，严重的需要截肢甚至死亡，因此快捷灵敏检查创伤弧菌具有重要的意义。为此本公司开发了创伤弧菌染料法LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供DNA样品。
2.恒温扩增，可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
3.检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
4.特异性高，根据创伤弧菌DNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
5.一般30分钟内出结果，比PCR快。
6.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到14 μL。
7.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
8.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
9.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
10.本产品足够50次20 μL体系的荧光LAMP扩增。
11.只可用于科研。

规格及成分
本产品采购五孔盒包装
成份                                                                        编号                规格            包装
4×LAMP MasterMix （荧光染料法，待加酶）    211222a             200μL   0.5mL绿盖管
Bst DNA聚合酶2.0                                            11-220319          50μL       0.5mL红盖管
超纯水                                                                    210806            1 mL       1.5mL蓝盖管
20×创伤弧菌LAMP引物干粉                    yw16-14880dx3          50次       0.5mL白盖管
创伤弧菌LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL） pc14880-M34670    250 μL    0.5mL黄盖管
使用手册                                                        18-14880sc               1份            无
注意：首次使用本试剂盒时，需要加入55μL超纯水到引物干粉管中，涡旋震荡半分钟混匀，得到20×引物混合液。短暂离心后即可使用。未用完的需要放-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备试剂
待测样品

使用方法
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水作为样品制备PC，加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。

二、LAMP反应（20μL体系）
1.反应设置：第一次使用时请把所有Bst DNA聚合酶2.0（50μL，本试剂盒提供）加入到 4×LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶）中，轻柔颠倒20次充分混匀，然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分                                                N+2个样品管    LAMP阴性对照    LAMP阳性对照
4×荧光LAMP MasterMix （加酶后）    各5 μL             5 μL                  5 μL
20×创伤弧菌LAMP引物混合液              各1 μL            1 μL                    1 μL
N+2个样品DNA                                    各14 μL               -                      -
超纯水                                                        -               14 μL                  -
第2步所得阳性对照的10倍稀释液               -              -                           14μL
2.放荧光定量PCR仪上扩增，设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。

三、结果分析
1.电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。LAMP阳性对照必须有正常LAMP条带（200bp左右的梯形扩增产物），LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：

2.荧光分析（仅限于用qPCR仪进行反应的场景）：样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。

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