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粪肠球菌荧光染料法LAMP试剂盒

发布时间：2025/11/27 11:47:33 阅读次数：9

CAT#:JW-18-62020
低温运输，-20℃保存

粪肠球菌荧光染料法LAMP试剂盒

产品及特点
粪肠球菌（Enterococcus faecalis）是革兰氏阳性，过氧化氢阴性球菌，是人和动物肠道内主要菌群之一，其能产生天然抗生素，有利于机体健康；同时还能产生细菌素等抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长，改善肠道微环境；还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，减少肠道尿素酶和内毒素的含量，使血液中氨和内毒素的含量下降。粪肠球菌作为一种益生菌，在医学和食品工程领域得到广泛应用。另外，肠球菌为消化道内正常存在的一类微生物，在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力，并且是一种兼性厌氧的乳酸菌，与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比，更适合于生产和应用。因此对粪肠球菌的快速准确鉴定有重要的意义，为此本公司根据荧光染料法LMAP技术，开发了简单快捷的粪肠球菌LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供DNA样品。
2.恒温扩增，可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
3.检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
4.特异性高，根据粪肠球菌DNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
5.一般30分钟内出结果，比PCR快。
6.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到14 μL。
7.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
8.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
9.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
10.本产品足够50次20 μL体系的荧光LAMP扩增。
11.只可用于科研。

规格及成分
本产品采购5孔盒包装
成份                                                                        编号           规格        包装
4×LAMP MasterMix （荧光染料法，待加酶）    211222a        200μL    0.5mL绿盖管
Bst DNA聚合酶2.0                                           11-220319      50μL   0.5mL红盖管
20×粪肠球菌LAMP引物混合液干粉                yw16-62020    50次    0.5mL白盖管
粪肠球菌LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL）        pc62020     250μL    0.5mL黄盖管
超纯水                                                                    210806      1 mL       1.5mL蓝盖管
使用手册                                                        18-62020sc        1份            无
注意：首次使用本试剂盒时，需要加入55μL超纯水到引物干粉管中，涡旋震荡半分钟混匀，得到20×引物混合液。短暂离心后即可使用。未用完的需要放-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂
待测样品，荧光定量PCR仪。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水作为样品制备PC，加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。

二、LAMP反应（20μL体系）
1.反应设置：第一次使用时请把所有Bst DNA聚合酶2.0（50μL，本试剂盒提供）加入到 4×LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶）中，轻柔颠倒20次充分混匀，然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分                                                N+2个样品管    LAMP阴性对照    LAMP阳性对照
4×荧光LAMP MagicMix（加酶后）    各5 μL               5 μL                    5 μL
20×粪肠球菌LAMP引物混合液          各1 μL                1 μL                  1 μL
N+2个样品DNA                               各14 μL                -                          -
超纯水                                                   -                  14 μL                        -
第2步所得阳性对照的10倍稀释液         -                     -                        14μL
2.放荧光定量PCR仪上扩增，设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。

三、结果分析
1.电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。LAMP阳性对照必须有正常LAMP条带（200bp左右的梯形扩增产物），LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：

2.荧光分析（仅限于用qPCR仪进行反应的场景）：样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。

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