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双峰骆驼源性成分探针法PCR试剂盒

发布时间：2025/11/27 14:32:44 阅读次数：3

CAT#:JW-17-114
低温运输，-20℃保存

双峰骆驼源性成分探针法PCR试剂盒

产品及特点
本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有双峰骆驼源性成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本公司开发了简单快捷的双峰骆驼源性成分探针法荧光定量PCR检测试剂盒，它具有下列特点:：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.提供阳性对照和内参，便于排除假阴性结果。
3.根据双峰骆驼保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的双峰骆驼成分。
4.对混合样品中双峰骆驼成分的检测下限为0.01%，对样品中双峰骆驼成分的核酸检测下限为0.1ng/μL。
5.既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5各数量级。
6.一管式闭管操作，降低了交叉污染。
7.本产品足够50次20μL体系的探针法PCR反应。
8.快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为2.0小时。
9.本只能用于科研，足够50次20uL体系的荧光定量PCR。

规格及成分
本产品使用五孔盒包装
成分                                                                           编号        规格       包装材料
2×Probe qPCR MagicMix                                        981201    0.5 mL    0.5mL本色管
荧光PCR专用模板稀释液                                        180701   1 mL        1.5 mL绿盖管
双峰骆驼qPCR引物-探针混合液（含内参探针）    yp17-114    200 μL    0.5mL棕色管
双峰骆驼PCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL)                    pc114     50 μL   0.5mL黄盖管
双峰骆驼PCR内参(1×10E4拷贝/μL)                    Icpd17-114    250 μL    0.5mL白盖管
使用手册                                                               17-114sc    1份               无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、稀释含内参的标准曲线样品（以阳性对照10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度和内参固定在10E3拷贝/μL为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1.标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1，0。
2.在0号管中加入280μL荧光PCR专用模板稀释液，35μL本试剂盒提供的内参，震荡一分钟混匀。
3.用带芯枪头分别将上步得到的混合液按45μL/管加入到标记的1-6号管中，最好用带芯枪头（下同）。
4.在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.换枪头，在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
7.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线阳性样品，每个样品中内参的浓度固定为10E3拷贝/μL。放冰上待用。

二、样品DNA的制备
8.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。最后在所有样本中加入5uL 本试剂盒提供的内参（共50000拷贝）。
9.用自选方法纯化样品的DNA（含内参），本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
10.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
11.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）：
成分                                                           样品管N+2个    PCR阴性对照    标准曲线样品管（1-6管）
2×Probe qPCR MagicMix                                各10 μL          10 μL                   各10 μL
双峰骆驼PCR引物-探针混合液(含内参引物)    各4 μL               4 μL                    各4 μL
N+2个待测DNA（含内参）                             各6 μL             不加                  不加
超纯水                                                               不加             6 μL                  不加
第6步所得标准曲线样品稀释液（含内参，1-6号）    不加    不加    各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）
12.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程                  温度    时间
预变性           95℃    3 min
PCR反应
（45个循环）    95℃    10 sec
                          60℃    60 sec
                            72℃    60 sec（采集FAM通道和Hex通道的
荧光信号，淬灭基团均为TAMRA）

四、数据处理
13.如果扩增阳性对照或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。对任何阴性样品，如果内参无Ct，则此样品的阴性结果无效，此样品需要重复实验。
14.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，分别以阳性对照（FAM通道）和内参（HEX通道）的Ct值为纵轴，绘制标准曲线，阳性对照的标准曲线为斜线，r2必须大于0.95，内参的标准曲线为一条跟X轴平行的横线。再以待测样品的Ct值从阳性对照的标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
15.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照FAM通道的Ct必须大于或等于40。阳性对照FAM通道的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于35。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。对任何FAM通道结果为阴性的样品，如果其对应的内参HEX通道无Ct，则此样品的阴性结果无效，此样品需要重复实验。

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