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人免疫缺陷病毒I型可视化染料-荧光染料RT-LAMP试剂盒

发布时间：2025/12/1 11:19:32 阅读次数：3

CAT#:JW-16-22900
低温运输，-20℃保存

人免疫缺陷病毒I型可视化染料-荧光染料RT-LAMP试剂盒

产品及特点
人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus、 HIV），即艾滋病（AIDS，获得性免疫缺陷综合征）病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。1981年，人类免疫缺陷病毒在美国首次发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒，属逆转录病毒的一种。目前全球流行的主要是HIV-1。因此快速灵敏诊断HIV-1具有重要意义，为此本公司根据独有的双染料RT-LMAP技术，开发了简单快捷的人类免疫缺陷病毒I型RT-LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供病毒RNA样品。
2.恒温扩增，可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
3.含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
4.检测灵敏性一般比RT-PCR高10倍以上，分析灵敏度可以达到100拷贝/反应左右。
5.特异性高，根据人类免疫缺陷病毒I型RNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
6.一般30分钟内出结果，比RT-PCR快。
7.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
8.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
9.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到13μL。
10.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
11.本产品足够50次20 μL体系的染料法荧光及可视化RT-LAMP扩增。
12.只可用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                                                                        编号                             规格            包装
RT-LAMP MasterMix（可视化染料-荧光染料，待加酶）      211224a                       200μL    0.5 mL本色盖
逆转录酶-扩增酶混合液                                                        211208b                      100μL    0.5 mL红盖管
20×人类免疫缺陷病毒I型RT-LAMP引物干粉                          yw16-22900yl        50次       0.5 mL白盖管
人类免疫缺陷病毒I型RT-LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL） pc22900-AF033819    250μL    0.5 mL黄盖管
超纯水                                                                              210806                      1 mL    1.5 mL蓝盖管
使用手册                                                                             16-22900sc                    1份           无
注意：引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入55 uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为两年。

自备试剂
待测样品。

使用方法
一、样品RNA的制备
1.用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水充当，总体积必须核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样，NC用水替代。

二、RT-LAMP反应（20μL体系）
3.注意：第一次使用一个新的试剂盒时，必须先将100uL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（可视化染料-荧光染料，待加酶）中，盖上盖子后轻柔颠倒1分钟混匀，然后再取用。
4.反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则最好设置N+4个RT-LAMP扩增，增加RT-LAMP阴性对照和RT-LAMP阳性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分                                                                                   N+2个样品管    RT-LAMP阴性对照    RT-LAMP阳性对照
RT-LAMP MasterMix（可视化染料-荧光染料，已加酶）    各6 μL                       6 μL                      6 μL
20×人类免疫缺陷病毒I型RT-LAMP引物混合液                   各1 μL                       1 μL                        1 μL
N+2个样品RNA                                                                   各13 μL                      -                               -
超纯水                                                                                  -                     13 μL                         -
人类免疫缺陷病毒I型RT-LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL） -                        -                      13 μL
5.本产品含两种染料，故最好使用荧光PCR仪器进行扩增。设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。

三、结果分析
6.电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL RT-LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。RT-LAMP阳性对照必须有正常RT-LAMP条带（200bp左右的梯形扩增产物），RT-LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果RT-LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：

7.可将光（肉眼）分析：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈蓝色，样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈淡蓝色或无色，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明样品为阳性，如果接近阴性对照则说明待测样品为阴性。典型的可将光检测结果见左图（9为阴性，10为阳性）。

8.荧光分析（仅限于用qPCR仪进行反应的场景）：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和RT-LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。

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