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丙型肝炎病毒荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

发布时间：2025/12/2 14:49:05 阅读次数：2

CAT#:JW-16-53000
低温运输，-20℃保存

丙型肝炎病毒荧光及可视化RT-LAMP试剂盒

产品及特点
丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）感染引起的病毒性肝炎，主要经血液传染，据世界卫生组织统
计，全球 HCV 的感染率约为 3%，估计约 1.8 亿人感染了 HCV，每年新发丙型肝炎病例约 3.5 万例。丙型肝炎可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，因此快速灵敏诊断 HCV 具有重要意义，为此本公司根据独有的双染料RT-LMAP技术，开发了简单快捷的丙型肝炎病毒RT-LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供病毒RNA样品。
2.恒温扩增，可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
3.含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
4.检测灵敏性一般比RT-PCR高10倍以上，分析灵敏度可以达到100拷贝/反应左右。
5.特异性高，根据丙型肝炎病毒RNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
6.一般30分钟内出结果，比RT-PCR快。
7.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
8.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
9.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到13μL。
10.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
11.本产品足够50次20 μL体系的染料法荧光及可视化RT-LAMP扩增。
12.只可用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                                                                              编号          规格               包装
RT-LAMP MasterMix（可视化染料-荧光染料，待加酶）            211224a       200μL    0.5 mL本色盖
逆转录酶-扩增酶混合液                                                                211208b     100μL    0.5 mL红盖管
20×丙型肝炎病毒RT-LAMP引物干粉                                   yw16-53000-lm    50次 0.5 mL白盖管
丙型肝炎病毒RT-LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL）   pc60908-53000    250μL    0.5 mL黄盖管
超纯水                                                                                             210806      1 mL     1.5 mL蓝盖管
使用手册                                                                               16-53000sc    1份                无
注意：引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入55 uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为两年。

自备试剂
待测样品。

使用方法
一、样品RNA的制备
1.用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水充当，总体积必须核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样，NC用水替代。

二、RT-LAMP反应（20μL体系）
3.注意：第一次使用一个新的试剂盒时，必须先将100uL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（可视化染料-荧光染料，待加酶）中，盖上盖子后轻柔颠倒1分钟混匀，然后再取用。
4.反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则最好设置N+4个RT-LAMP扩增，增加RT-LAMP阴性对照和RT-LAMP阳性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分                                                                                    N+2个样品管    RT-LAMP阴性对照    RT-LAMP阳性对照
RT-LAMP MasterMix（可视化染料-荧光染料，已加酶）      各6 μL                  6 μL                  6 μL
20×丙型肝炎病毒RT-LAMP引物混合液                                 各1 μL                   1 μL                 1 μL
N+2个样品RNA                                                                    各13 μL                    -                 -
超纯水                                                                                  -                      13 μL                  -
丙型肝炎病毒RT-LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL）                -                      -                     13 μL
5.本产品含两种染料，故最好使用荧光PCR仪器进行扩增。设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。

三、结果分析
6.电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL RT-LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。RT-LAMP阳性对照必须有正常RT-LAMP条带（200bp左右的梯形扩增产物），RT-LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果RT-LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：

7.可将光（肉眼）分析：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈蓝色，样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈淡蓝色或无色，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明样品为阳性，如果接近阴性对照则说明待测样品为阴性。典型的可将光检测结果见左图（9为阴性，10为阳性）。

8.荧光分析（仅限于用qPCR仪进行反应的场景）：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和RT-LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。

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