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人CYP3A4*1G基因25343G>T点突变探针法qPCR检测试剂盒

发布时间：2025/12/5 20:34:20 阅读次数：46

CAT#:JW-15-230829
低温运输，-20℃保存

人CYP3A4*1G基因25343G>T点突变探针法qPCR检测试剂盒

产品及特点
CYP酶是体内最重要的药物代谢酶，分为CYP1, 2, 3等家族，然后分别分为A, B, C等亚家族，末尾再接一个数值表示具体的亚型的酶，如CYP3A4是CYP3A亚家族中的重要一员，其活性在人类肝脏中占总CYP活性的60％，同时其在人体十二指肠、空肠和回肠中均有表达。CYP3A4*1G是目前已发现的中国人所有的CYP3A4单核苷酸多态性中发生频率最高的一个位点，是具有功能意义的突变。研究显示该基因多态性可能影响CYP3A4酶活性。因此研究25343G>T突变具有重要的研究意义，为此本公司开发了专门检测25343G>T突变的探针法qPCR检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到1000拷贝/μL。
3.分辨率高，能检测出5%的点突变。
4.一管式检测，野生型探针用FAM标记，突变型探针用HEX标记。
5.同时提供野生型和突变型两种阳性对照，便于排除假阴性样品。
6.特异性高，引物和探针是根据人CYP3A4*1G基因25343G>T突变设计，不会跟其他突变发生交叉反应。
7.本产品只能定性，不能定量。
8.本产品足够50次20 μL体系的点突变探针法荧光定量PCR反应。
9.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用5孔盒包装
成分                                                     编号           规格        包装
2×点突变Probe qPCR MasterMix        190303            0.5 mL    0.5 mL本色盖
超纯水                                                 210806           1 mL    1.5 mL蓝盖管
人CYP3A4*1G基因25343G>T位点检测
引物-探针混合液干粉      ywpb15- 15-230829    50次        0.5 mL白盖管
人CYP3A4*1G基因野生型
阳性对照(1×10E4拷贝/μL)           pc15-230829      250 μL    1.5 mL棕色管
人CYP3A4*1G基因
25343位点突变型
阳性对照(1×10E4拷贝/μL)    pc15-15-230829-25343G>T    250 μL    0.5 mL黄盖管
使用手册                                       15-230829sc          1份                    无
注意：使用前需要在引物探针干粉管中加入160 μL的自备超纯水，震荡混匀后再取用一次没用完剩下的需要放-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，则进行N次纯化，得到的DNA最后溶解在TE中，并需要用NanoDrop进行定量。最后的浓度不能低于0.2 μg/μL。
2.本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。

三、点突变Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
3.如果只做1次重复，则标记N+3个PCR管，其中N个用于上步得到的N样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板，NC），3个用于阳性对照（PC）。
4.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加）：
成分                   样品管N个    扩增NC    野生型PC    杂合型PC    突变型PC
2×点突变Probe
qPCR MasterMix        各10 μL        10 μL    10 μL            10 μL        10 μL
人CYP3A4*1G基因25343G>T位点检测
引物-探针混合液        各4 μL       4 μL        4 μL              4 μL      4 μL
N个DNA样本          各3 μL
超纯水                   各3 μL         6 μL         3 μL                                3 μL
人CYP3A4*1G基因野生型
阳性对照(1×10E4拷贝/μL)                                                   3 μL        3 μL
人CYP3A4*1G基因
25343位点突变型
阳性对照(1×10E4拷贝/μL)                                                     3 μL    3 μL
5.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程                    温度    时间
预变性              95℃    90 sec
PCR反应
（45个循环）    95℃    15 sec
                      60℃    60 sec（采集FAM和HEX通道的荧光信号，淬灭基团均为TAMRA）

五、数据处理
6.实验有效性的判断：首先分析扩增NC是否有FAM或/和HEX信号，如果有则表示实验污染，本次实验无效，无需分析所有实验数据，需要寻找原因。如果无则表示实验没有污染，再分析三个PC。如果野生型PC没有FAM扩增信号（有标准的倒S扩增曲线，下同），或突变型PC没有HEX扩增信号，或杂合型PC没有FAM和HEX扩增信号，则表示实验无效，不需要分析样本的数据，需要分析原因。如果三个PC正常（野生型PC有FAM扩增信号，突变型PC有HEX扩增信号，杂合型PC有FAM和HEX扩增信号），则实验有效，可以分析样本的数据。
7.如果荧光定量PCR仪有基因分型的自动分析模块，则进入该模块，获得每个样本的HEX值/FAM值的荧光比值，并根据荧光比值描出散点图。荧光比值位于散点图的X轴方向的样本可以判为突变型，荧光比值将位于Y轴方向的样本可以判为野生型，荧光比值位于X轴和Y轴中间的可以判为杂合子。扩增NC的荧光比值将位于原点附近。散点图的示例如下：

8.如果荧光定量PCR仪没有基因分型的自动分析模块，则需要手动分析。首先根据Ct值判断每个样本在FAM和HEX两个通道的扩增情况。如果FAM通道的Ct低于35，则算FAM信号有扩增。如果Ct大于35或没有Ct，则算FAM通道无扩增。HEX通道也如此操作。然后根据扩增结果按下表判断每个样本的基因型，得到无效数据的样本需要重复：
FAM通道    HEX通道    基因型判断
有扩增        无扩增      野生型
有扩增       有扩增       杂合子
无扩增       有扩增        突变型
无扩增        无扩增      阴性PC或无效数据

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