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Tth DNA 聚合酶,1U/μL

发布时间：2025/12/24 10:03:39 阅读次数：55

CAT#:JW-11-I990501
低温运输，-20℃保存

Tth DNA 聚合酶,1U/μL

产品及特点
本酶是来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8的耐热DNA聚合酶，它具有下列特点：
1.在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下，具有DNA多聚酶活性，与Taq酶一样被广泛用于PCR反应。
2.具有逆转录活性，在Mn2+存在的情况下，此活性增强。故可用于一管式RT-PCR。由于RT可以在较高的温度下（跟AMV和MMLV相比较而言）进行逆转录，引物非特异结合少，二级结构影响小，故RT的特异性更高。
3.耐热性比Taq酶高，适用于高GC含量模板。
4.基本上没有3'→5'外切酶活性，适用于双脱氧法测序。
5.具有5'→3'外切酶活性，适用于TaqMan探针法PCR。
6.PCR产物末端有随机加A现象，可通过T载体进行TA克隆。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                    编号                规格             包装
Tth DNA 聚合酶,1U/μL     11-990501a   50 μL      0.5 mL红盖管
2×Tth DNA聚合酶Buffer    11-990501b    500 μL    0.5 mL绿盖管
MgCl2溶液,50mM       11-990501c    50 μL 0.5 mL黄盖管
使用手册                 11-990501sc    1份           无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
模板RNA或DNA、引物。

使用方法
一、RT-PCR 反应
1.以RNA为模板，以2×Tth Buffer作为缓冲液进行体积为20 μL的RT-PCR扩增反应为例，按下列组份配制qRT-PCR反应液。
成份                                      用量
Tth DNA聚合酶,1U/μL           2 μL
2×Tth DNA聚合酶 Buffer      10 μL
MgCl2溶液,50mM                 1 μL
自备模板RNA                       详见后注
自备引物1（10 μM）         1 μL
自备引物2（10 μM）           1 μL
灭菌蒸馏水                        加到20 μL
注：推荐20μL qRT-PCR反应体系中模板RNA推荐使用量为400 ng
2.上机后按下面参数进行 RT-PCR：
过程              温度   时间
逆转录                60-70℃    30 min
预变性                95℃           5 min
PCR反应
（45个循环）   95℃           15 sec
                           65℃          60 sec
注：逆转录温度取决于下游引物的融解温度，70℃是Tth DNA 聚合酶的最适反应温度，但是温度的升高会加速RNA的降解。
3.取10μL扩增产物选择浓度合适的凝胶进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果。。

二、PCR反应
1.以DNA为模板，以2×Tth DNA聚合酶Buffer作为缓冲液进行体积为20 μL的PCR扩增反应为例，按下表设置制PCR：
成份                                    用量
Tth DNA聚合酶,1U/μL      1μL
2×Tth DNA聚合酶Buffer   10μL
MgCl2溶液,50mM                1μL
自备模板DNA                 详见后注
自备引物1（10 μM）        1μL
自备引物2（10 μM）        1μL
灭菌蒸馏水                        加到20μL
注：推荐20μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量为哺乳动物基因组DNA0.5-1 ug ，酵母基因组DNA 5-500 ng，细菌基因组DNA 0.5-50 ng，质粒DNA 5-500 pg，PCR回收片段1-100 pg。
2.上机后按下面参数进行PCR：
                        温度      时间
预变性                95℃    5 min
PCR反应
（45个循环）   95℃    15 sec
                         65℃    60 sec
注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。
3.取10μL扩增产物选择浓度合适的凝胶进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果。

相关资料
一：Tth Storage Buffer组成
成份                                      浓度
Tris-HCl(pH7.5 at 25 ℃)     10 mM
KCl                                  300 mM
DTT                                 1 mM
EDTA                                  0.1 mM
Triton X- 100                        0.1%
BSA                                     500μg/mL
甘油                                   50%

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