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红薯源性成分探针法qPCR试剂盒（不含内参）

发布时间：2026/1/12 14:55:33 阅读次数：8

CAT#:JW-15-183
低温运输，-20℃保存

红薯源性成分探针法qPCR试剂盒（不含内参）

产品及特点
红薯富含淀粉，是农作物中营养种较多的食品之一。但目前市场上也存在两方面的问题：一方面是红薯加工过程中混入掺杂其他来源，如木薯、玉米淀粉等低价值淀粉损害消费者利益；另一方面在一些成本相对较高的淀粉如马蹄淀粉中掺入价格较低的红薯淀粉，扰乱淀粉市场。因此红薯源性成分（Ipomoea batatas-Ingredient）的鉴定和精确定量在食品安全监管当中具有重要意义。为此本公司以探针法qPCR技术为基础开发了红薯源性成分的检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏度高，最低检测限可达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据红薯源性成分基因组DNA高度保守区设计，不会跟其它生物的DNA发生交叉反应。
5.既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时，线性范围至少5个数量级。
6.本产品足够50次20 μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用五孔盒包装
成分                                                            编号      规格           包装
2×Probe qPCR MasterMix                  981201       500 μL    0.5 mL本色盖
荧光PCR专用模板稀释液                       180701       1 mL    1.5 mL绿盖管
超纯水                                                   210806      1 mL    1.5mL蓝盖管
红薯源性成分qPCR引物-探针干粉        yp15-183    50 次    0.5 mL白盖管
红薯源性成分阳性对照(1E7拷贝/μL)        pc183       50 μL    0.5 mL黄盖管
使用手册                                                sc15-183    1 份          无
注意：引物-探针干粉在使用前需要离心，然后在离心管中加入165 mL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备物品
超纯水，样品DNA。

使用方法
一、稀释标准曲线样品（以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能
污染样品或本试剂盒的其他成分。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头（下同）。
3.在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡混匀1分钟，得到1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡混匀1分钟，得到1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL的阳性对照(上步所得)，充分震荡混匀1分钟，得到1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.依次重复上面的操作得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、qPCR 反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设
置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
成分                                                   样品管N+3个    PCR阴性对照管    标曲样品管（1-6）
2×Probe qPCRMasterMix                       各10 μL           10 μL              各10 μL
红薯源性成分qPCR引物-探针混合液        各3 μL            3 μL                 各3 μL
待测样本DNA模板                                    7 μL                 不加                不加
超纯水                                                        不加              7 μL              不加
第6步所得标准曲线样品稀释液（1-6号）不加           不加            各7 μL（1号样到1号管，2号样到2号管…）
11.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程                   温度    时间
预变性               95℃    5 min
PCR反应
（45个循环）    95℃    15 sec
                           60℃    1min
（采集FAM通道，淬灭基团为TAMRA）

四、数据处理
12.如果扩增阳性对照或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。
13.如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。
14.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
15.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果Ct小于40则为阳性。

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