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衣原体通用探针法qPCR试剂盒

发布时间：2026/1/15 18:41:17 阅读次数：3

CAT#:JW-15-11300
低温运输，-20℃保存

衣原体通用探针法qPCR试剂盒

产品及特点
衣原体（Chlamydia spp.）是一种比细菌小但比病毒大的生物，是专性细胞内寄生的、近似细菌与病毒的病原体，具有两相生活环。它没有合成高能化合物ATP、GTP的能力，必须由宿主细胞提供，因而成为能量寄生物，多呈球状、堆状，有细胞壁，有细胞膜，属原核细胞，一般寄生在动物细胞内。其中的肺炎衣原体被认为是肺炎、支气管炎及其他呼吸道感染的常见病因；鹦鹉热衣原体可引起鹦鹉热，是人类吸入受感染的鸟的排泄物的干燥尘粒而感染，发病时常有高烧、头痛、肌肉痛、寒战和上下呼吸道不适，部分患者可并发脑炎、心肌炎或血栓性静脉炎。沙眼衣原体除可导致沙眼外，还是公认的性传播疾病的传染源之一。在非淋菌性尿道炎中，几乎一半是由沙眼衣原体传染造成的。它还可以引起尿道综合征和性病性淋巴肉芽肿、男性尿道炎、附睾炎、女性不育、子宫颈炎、盆腔炎等。新生儿通过产道感染可引起新生儿眼炎或新生儿肺炎。因此快速检测衣原体具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测衣原体的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据衣原体DNA的高度保守区设计，in silico分析发现其不会跟其他非衣原体的DNA发生交叉反应。
5.可以检测至少6种常见的支原体：Chlamydia abortus，Chlamydia pecorum，Chlamydia pneumonia，Chlamydia psittaci，Chlamydia suis，Chlamydia trachomatis。
6.本产品既可以定量，也可以定性。定量时其线性范围至少有5个数量级。
7.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
8.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成分                                                                      编号                       规格          包装
2×Probe qPCR MasterMix                                981201                      0.5 mL    0.5mL本色盖
荧光PCR专用模板稀释液                                   180701                       1 mL        1.5mL绿盖管
超纯水                                                              210806                       1 mL       1.5mL蓝盖管
衣原体通用探针法qPCR引物-探针混合液            yp15-11300               150 μL    0.5mL棕色管
衣原体通用PCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL)           pc11300-D89067.1    50 μL    0.5mL黄盖管
使用手册                                                              15-11300sc                1份            无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、稀释标准曲线样品（以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA，本扩增试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以使用本公司的核酸提取试剂盒。

三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（可直接用第6步所得的第4号稀释液）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
成分                                                           样品管N+2个    PCR阴性对照管    标准曲线样品管（1-6管）
2×Probe qPCR MasterMix                           10 μL                   10 μL                       各10 μL
衣原体通用探针法qPCR引物-探针混合液    3 μL                       3 μL                      各3 μL
N+2个待测DNA模板                                  7 μL                       不加                        不加
超纯水                                                           不加                     7 μL                      不加
第6步所得标准曲线样品稀释液（1-6号）    不加                       不加           各7μL（1号样到1号管，2号样到2号管…）
11.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程                   温度    时间
预变性              95℃    3 min
PCR反应
（45个循环）    95℃    15sec
                           60℃    60sec（采集FAM通道的荧光信号，设置3`TAMRA为淬灭基团）

四、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果Ct小于40则为阳性。

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