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山羊痘病毒探针法qPCR试剂盒

发布时间：2026/2/12 16:44:48 阅读次数：35

CAT#:JW-15-33100
低温运输，-20℃保存

山羊痘病毒探针法qPCR试剂盒

产品及特点
山羊痘病毒（Goat Pox Virus, GPV）为痘病毒科羊痘病毒属成员，为双链DNA病毒，基因组DNA大小约为145 kb。病毒粒子呈砖形或卵圆形，有囊膜。山羊痘病毒感染引起山羊痘，以体温升高、全身性丘疹或结节、水泡(少数)、内脏病变(特别是肺脏)乃至死亡为特征。因此快速检测山羊痘病毒具有重要的意义。本产品就是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测山羊痘病毒的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，分析灵敏度高，可以达到100拷贝/μL。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据山羊痘病毒DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
5.既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6.本产品足够50次20 μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
成分                                                               编号          规格        五孔盒包装
2×Probe qPCR MasterMix                      981201             0.5 mL    0.5 mL本色盖
荧光PCR专用模板稀释液                           180701          1 mL   1.5 mL绿盖管
超纯水                                                      210806          1 mL   1.5 mL蓝盖管
山羊痘病毒qPCR引物-探针干粉              yp15-33100yj    50次 0.5 mL棕色管
山羊痘病毒qPCR阳性对照(1E7拷贝/μL)    pd33100yj        50 μL    50 mL黄盖管
使用手册                                                  15-33100sc      1份        1份
本产品采用五孔盒包装
注意:引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入165 μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、稀释标准曲线样品（以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、Probe qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
成分                                                       样品管N+2个    PCR阴性对照    标准曲线样品管（1-6管）
2×Probe qPCR MagicMix                            各10 μL            10 μL                       各10 μL
山羊痘病毒qPCR引物-探针混合液            各3 μL                3 μL                        各3 μL
N+2个待测DNA样本                                   各7 μL              不加                          不加
超纯水                                                        不加                 7 μL                           不加
第6步所得标准曲线样品稀释液（1-6号）    不加                   不加    各7 μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）
11.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程                  温度    时间
预变性                95℃    3 min
PCR反应
（45个循环）    95℃    15 sec
                      60℃    30 sec（采集FAM通道的荧光信号，设置BHQ1为淬灭基团）

五、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或者大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或者大于或等于40则为阴性，如果Ct小于40则为阳性。

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