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影响ELISA试剂盒检测的因素有哪些

发布时间:2019/6/18 15:24:00      阅读次数:1249

 

    ELISA酶联免疫吸附,是一种常用的固相酶免疫测定方法。 由于ELISA方法简单,方便,灵敏,特异性强不需要特殊设备(只需要酶标仪就可以),所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。

      影响ELISA测定因素有很多,而其操作中需要有一定的技术要求,如操作手法,环境,样本等,有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性)等,上海极威生物为大家解读ELISA检测的影响因素之一-样本的影响

     样本的影响有哪些?

    1、样本的保存在冰箱中保存过久的标本,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性;为避免上述问题ELISA试剂盒测定血清标本时最好能新鲜采集;如果不能立即测定,根据相应的时间保存相应的温度,5 d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应-20低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。

    2、样本的时间:因为塑料试管能吸附抗原物质,所以样本长时间放在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。最好的方法是使用真空采血管;并使用非抗凝标本,肝素抗凝血浆会增加OD值,EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

    3、样本受细菌污染因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被细菌污染的标本同溶血标本一样,可能会产生非特异性显色而干扰测定结果。

    4、样本的凝固:样本凝固不全。在实验中有的时候心急为了争取时间快速检测,ELISA试剂盒在血液还未开始凝固的时候就强行离心分离血清,导致血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果;因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

5、样本溶血:溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素),ELISA试剂盒在洗涤过程中往往难以完全洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧(O),从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,即显蓝色,产生假阳性[2]。所以严重溶血标本禁用。

    上海极威生物科技有限公司专业生产各类ELISA试剂盒,公司涵盖的产品有:ELISA试剂盒、抗体、血清、培养基、细胞株、生物试剂、化学试剂、各类进口试剂及耗材等,品种齐全、质量保障,价格优惠,欢迎各位老师来电咨询!


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