细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒-说明/价格-极威生物
包装清单：
产品编号 产品名称 包装
C1052-1 染色缓冲液 25ml
C1052-2 碘化丙啶染色液(20X) 1.25ml
C1052-3 RNase A(50X) 0.5ml
— 说明书 1 份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。C1052-2 碘化丙啶染色液(20X)需避光保存。本试剂盒可 4℃保存，一个月内有效。
注意事项：
本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。需自备 PBS 和 70%乙醇，PBS(C0221A)可以向我司订购。荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。碘化丙啶对人体有刺激性，请注意适当防护。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒-说明/价格-极威生物
使用说明：
1. 细胞样品的准备：
a. 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000g 左右离心 3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50 微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1 毫升冰浴预冷的 PBS，重悬细胞，并转移到 1.5 毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约 50 微升左右的 PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
b. 对于悬浮细胞：1000g 左右离心 3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50 微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1 毫升冰浴预冷的 PBS，重悬细胞，并转移到 1.5 毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约 50 微升左右的 PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2. 细胞固定：加入 1 毫升冰浴预冷 70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃固定 2 小时或更长时间。固定 12-24小时可能效果更佳。1000g 左右离心 3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50 微升左右的 70%乙醇，以避免吸走细胞。加入约 1 毫升冰浴预冷的 PBS，重悬细胞。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约 50 微升左右的 PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
3. 碘化丙啶染色液的配制：参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液：
1 个样品 6 个样品 12 个样品 染色缓冲液
0.5ml 3ml 6ml 碘化丙啶染色液(20X)
25μl 150μl 300μl RNase A(50X)
10μl 60μl 120μl Final volume
0.535ml 3.21ml 6.42ml
注：配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以 4℃保存，宜当日使用。
4. 染色：每管细胞样品中加入 0.5 毫升碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴 30 分钟。随后可以 4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在 24 小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。
5. 流式检测和分析：用流式细胞仪在激发波长 488nm 波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA 含量分析和光散射分析。
