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贴壁细胞复苏操作步骤

发布时间：2022/11/18 14:57:53 阅读次数：172

一、细胞复苏前，将实验所需的器材全部消毒放入超净台

1、取枪头盒，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

2、取提前配好的完全培养基，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

3、取15ml离心管，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

4、取移液管，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

5、取T25瓶，用75%的酒精全方位喷洒，消毒并擦干后，放入超净台，

准备一根15ml离心管，在离心管管身，做好相应的标记信息，实验物品准备完成后，从液氮中取出冻存管细胞，放进37℃水浴锅内解冻细胞，解冻时，在水浴锅内晃动冻存管，迅速解冻，注意不要让冻存管管口没入水中，解冻至冻存管内仅剩一颗小冰珠为佳。

用新的移液管，取5ml完全培养基，同时将冻存管中的细胞悬液，一起移入15ml离心管内，进行离心操作，使用后的移液管，装回原包装内再丢弃，离心时，细胞配平放置，离心力200g，根据细胞特性不同，离心5-10min，取新的T25培养瓶，在瓶身做好标记备用，离心后，观察细胞是否已经完全沉淀，确认完全沉淀后，在超净台内，使用吸引器吸引新的枪头，吸除离心管内的废液，吸除时，需要注意观察，避免将沉淀的细胞吸除。

取新的移液管，吸取7ml完全培养基，加入到离心管内，进行轻微吹打，让细胞重悬并分开，为了让细胞更好的培养，建议使用厂家出品的完全培养基，因为厂家出品的完全培养基，是经过千种细胞的培养测试后，挑选出来的优品，吹打均匀后，将细胞悬液全部吸入移液管，转入培养瓶内，开拧瓶盖时，为避免污染，手指尽量远离瓶口，使用后的移液管，装回原包装内再丢弃，来回摇晃，使细胞分布均匀，将培养瓶放入37℃培养箱内，瓶盖拧松半圈，平放培养，细胞特性不同，贴壁时间也不同，建议前三天，在培养基颜色不变的前提下，先不要着急换液，若有疑问，请随时咨询厂家细胞技术员，极威生物将给您提供最优质的服务。

注：贴壁细胞复苏注意事项

1、细胞从液氮中取出来，一定要先储存在干冰里。

2、细胞在37℃水浴锅内快速融化。（避免融化过慢，损伤细胞）

3、离心后观察细胞沉淀，保证细胞全部离心下来。