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发布时间：2023/7/7 17:41:19 阅读次数：299
SDS-PAGE电泳试剂盒
SDS-PAGEElectrophoresisKit
产品及特点：
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为了解决此问题，本公司开发了本产品。它具有下列特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2.安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。
3.灵活，用于可以用30%的丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺母液，自行配制各种浓度的PAGE胶，满足分离不同大小蛋白质的需求。
4.使用含染料的改良浓缩胶缓冲液，浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。
5.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
6.本产品只能用于科研。
规格及成分
下列成分用大纸盒包装，常温运输
| 成份 | 编号 | 规格 | 包装 |
| 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺干粉(19:1) | 220959a | 57g+3g | 250mL棕色瓶 |
| 4×分离胶缓冲液 | 5-475 | 200mL | 250mL本色瓶 |
| 4×改良浓缩胶缓冲液 | 230323 | 100mL | 120mL本色瓶 |
| TEMED | 110-18-9 | 1.5mL | 2mL白盖管 |
| 过硫酸铵 | 100879 | 1g | 1.5mL白盖管 |
| SDS-PAGE电泳液干粉 | 220996 | 368g | 250mL本色瓶 |
| 使用手册 | 220959sc | 1份 | 无 |
下列成分塑料袋包装，低温运输
| 成份 | 编号 | 规格 | 包装 |
| 5×SDS-PAGE上样液 | 220624 | 1mL | 1.5mL白盖管 |
运输及保存
常温运输和保存，但5×SDS-PAGE上样液需低温运输，-20℃保存。有效期一年
自备试剂：去离子水
使用方法：
注意：第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液(30%AB溶液，下同)
1.在本产品提供的装有57g丙烯酰胺/3g甲叉双丙烯酰胺干粉的瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃10-20分钟即得200mL 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液(以下简称30%AB溶液)。丙烯酰胺与甲叉双丙烯
酰胺比例在19:1时，PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。配好的30% AB溶液最好4℃避光保存并在1月内用完。
2.根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表:
| 蛋白质大小范围(kD) | 最佳浓缩胶浓度 | 最佳分离胶浓度 |
| 15-45 | 4% | 15% |
| 15-60 | 4% | 12.5% |
| 18-75 | 4% | 10% |
| 30-120 | 4% | 7.5% |
| 60-200 | 不需要 | 5% |
注：如果上样体积少于10uL，可以不需要浓缩胶。
3.配制10%的APS(过硫酸铵)：称0.1克过APS干粉到1mL去离子水中，摇晃溶解。没用完的10%APS溶液需4℃存放，一周后就不能再用。
4.配制分离胶溶液：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%的AB溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。
| 分离胶浓度 | 用量(单位：mL) | ||
|
| 水 | 30%AB溶液 | 4×分离胶缓冲液 |
| 5% | 5.83 | 1.67 | 2.50 |
| 6% | 5.50 | 2.00 | 2.50 |
| 7% | 5.17 | 2.33 | 2.50 |
| 7.5% | 5.00 | 2.50 | 2.50 |
| 8% | 4.83 | 2.67 | 2.50 |
| 9% | 4.50 | 3.00 | 2.50 |
| 10% | 4.17 | 3.33 | 2.50 |
| 11% | 3.83 | 3.67 | 2.50 |
| 12% | 3.50 | 4.00 | 2.50 |
| 13% | 3.17 | 4.33 | 2.50 |
| 14% | 2.83 | 4.67 | 2.50 |
| 15% | 2.50 | 5.00 | 2.50 |
| 16% | 2.17 | 5.33 | 2.50 |
5.配制浓缩胶溶液(一般使用4%的浓度)：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%AB溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10mL4%
浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
| 浓缩胶浓度 | 用量(单位：mL) | ||
|
| 水 | 30%AB溶液 | 4×改良浓缩胶缓冲液 |
| 4% | 6.17 | 1.33 | 2.50 |
6.将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应，胶凝固时间会更长)。
7.各加入50uL10%APS和40uLTEMED(这是配制10mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀。
8.先灌分离胶，在分离胶的液面距离顶部1.5cm的时候，停止灌胶。
9.由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破
坏分离胶和浓缩胶的交接面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。也可以等分离胶在室温聚合30-60分钟，胶凝固后再灌制。
10.拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2L去离子水中即得
10×SDS-PAGE电泳液(测pH应该在8.3，如果不是8.3务必用NaOH或HCl调到8.3)，用时再用去离子水稀释成1×工作液。
11.将凝胶板固定在电泳装置上，往上下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。
12.在待电泳的蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4uL样品中加1uL上样液)，100℃煮沸3-5分钟。短暂离心，取上清上样。
13.先用10mA的电流电泳(对0.75mm厚×14cm×14cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
14.将电流增加到15mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的染色等实验处理。
关联产品：改良Bradford法蛋白浓度测定试剂盒(直接测SDS-PAGE上样液中的蛋白)
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