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发布时间：2026/8/4 10:32:31 阅读次数：37
纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
纯化线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成电子受体染料，通过反应系统测定染料还原后峰值的降低，即采用比色法测算样品中单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体裂解悬液样品琥珀酸脱氢酶的特异性活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景
琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料二氯靛酚钠（2,6-Dichloroindophenol sodium；DCIP），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，在分光光度仪下，其吸光值（600nm波长）的变化，来测算琥珀酸脱氢酶的活性。其反应方式为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液A（Reagent D1） 管
反应液B（Reagent D2） 毫升
底物液（Reagent E） 毫升
阴性液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液B（Reagent D2）含有毒性物质，避免直接用手接触；底物液（Reagent E），避免光照；有效保证3月
用户自备
HANK平衡盐缓冲溶液（G&VS12028）或PBS缓冲溶液（G&VS12033）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于细胞处理所需的培养基
50毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
4℃（微型）台式离心机：用于样品处理
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织
恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育
比色皿：用于比色测定的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；底物液（Reagent E）注意避光。然后进行下列操作。
一、样品准备
1）组织样品线粒体制备
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定200毫克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗
4． （选择步骤）抽去清洗液
5． 移入到一个液氮冻存管
6． 即刻放进液氮罐过夜
7． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
8． 放进一个15毫升锥形离心管
9． 加入置于冰槽里的xx毫升裂解液（Reagent B）
10． 涡旋震荡5秒，充分混匀
11． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
12． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）
13． 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
14． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为1500g
15． 小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管
16． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g
17． 小心抽去上清液
18． 加入xx微升裂解液（Reagent B），混匀颗粒群
19． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
20． 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用
2）细胞样品线粒体制备
1． 准备5瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（1 X 107），直至细胞生长铺满整个培养表面
2． 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
3． 重复实验步骤2一次
4． 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个细胞生长表面
5． 置入37℃培养箱3分种
6． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落，
7． 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移入一个50毫升锥形离心管
9． 放进台式离心机离心10分钟，速度为200g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升预冷的清理液（Reagent A），混匀细胞
12． 放进台式离心机离心10分钟，速度为300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入xx毫升预冷的裂解液（Reagent B）
15． 涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群
16． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
17． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）
18． 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
19． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为1500g
20． 小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管
21． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g
22． 小心抽去上清液
23． 加入xx微升裂解液（Reagent B），混匀颗粒群
24． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
25． 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用
二、测定准备
1． 准备好待测样品，置于冰槽里
2． 设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零
3． 实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的反应液A（Reagent D1）置于室温下均衡温度，然后加入xx毫升反应液B（Reagent D2），使其充分溶解，标记为反应工作液，置于冰槽里备用。
4． 缓冲液（Reagent C）在室温下均衡温度
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升反应工作液
3． 加入xx微升底物液（Reagent E）
4． 放进25℃培养箱里静置3分钟
5． 加入xx微升阴性液（Reagent F）
6． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：OD0分钟－OD5分钟
四、 样品活性测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升反应工作液
3． 加入xx微升底物液（Reagent E）
4． 放进25℃培养箱里静置3分钟
5． 加入100微升待测样品（注意：20微克线粒体蛋白；样品须溶解）
6． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：OD0分钟－OD5分钟
五、 计算样品活性
注意事项
1． 本产品为20次操作，包括背景对照测定
2． 操作时，须戴手套
3． 反应液B（Reagent D2）含有毒性物质，避免直接用手接触
4． 系统操作过程中，背景测定只需1次
5． 线粒体样品检测前，须溶解；建议冻存融解（－70℃至37℃）循环3次或使用线粒体溶解试剂盒－G&VS10018
6． 加入样品后3秒内即刻比色测定
7． 比色测定初始读数（0分钟读数）0.8左右为理想状态
8． 反应1分钟后比色测定值趋于稳定；测定值由高到低变化；测定持续5分钟
9． 测定值由高到低变化，即5分钟测定读数低于0分钟测定读数，表明有酶活性
10． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
11． 建议待测样本线粒体蛋白浓度为20微克/100微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；注意计算公式的调整（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
12． 活性计算时，可以选择5分钟内单位时间最大线性变化的吸光值
13． 琥珀酸脱氢酶单位活性定义为：在25℃，pH 7.5条件下，每分钟内能够还原1微摩尔氧化型二氯靛酚钠（DCIP）所需的酶量作为一个活性单位
14． 本公司提供系列细胞酶学技术产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测准确
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10103.3 纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS10103.3A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10103.3B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS10103.3C 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS10103.3D 反应液A（Reagent D1） 管
G&VS10103.3E 反应液B（Reagent D2） 毫升
G&VS10103.3F 底物液（Reagent E） 毫升
G&VS10103.3G 阴性液（Reagent F） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10103.1 | 细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10103.3 | 组织琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10103.3 | 线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10103.4 | 真菌/酵母琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10103.5 | 植物琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10156 | 分离线粒体纯度双酶法（SDH/AP）检测试剂盒 | 20次 |
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