当前位置：首页>技术专栏
发布时间：2026/8/4 10:39:59 阅读次数：39
细胞琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成电子受体染料，通过反应系统测定染料还原后峰值的降低，即采用比色法测算样品中单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种细胞裂解悬液和纯化线粒体样品琥珀酸脱氢酶的特异性活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景
琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料二氯靛酚钠（2,6-Dichloroindophenol sodium；DCIP），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，在分光光度仪下，其吸光值（600nm波长）的变化，来测算琥珀酸脱氢酶的活性。其反应方式为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液A（Reagent D1） 管
反应液B（Reagent D2） 毫升
底物液（Reagent E） 毫升
阴性液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液B（Reagent D2）含有毒性物质，避免直接用手接触；底物液（Reagent E），避免光照；有效保证3月
用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
细胞刮脱棒：用于脱离贴壁细胞
4℃（微型）台式离心机：用于样品处理
恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育
比色皿：用于比色测定的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；底物液（Reagent E）注意避光。然后进行下列操作。
一、样品准备
1． 准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 106细胞）
2． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）
5． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞
6． 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
7． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入xx微升裂解液（Reagent B），充分混匀
10． 转移到预冷的1.5毫升离心管
11． 强力涡旋震荡15秒
12． 置于冰槽里孵育30分钟
13． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、测定准备
1． 准备好待测样品，置于冰槽里
2． 设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零
3． 实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的反应液A（Reagent D1）置于室温下均衡温度，然后加入xx毫升反应液B（Reagent D2），使其充分溶解，标记为反应工作液，置于冰槽里备用。
4． 缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升反应工作液
3． 加入xx微升底物液（Reagent E）
4． 放进25℃培养箱里静置3分钟
5． 加入xx微升阴性液（Reagent F）
6． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：OD0分钟－OD5分钟
四、 样品活性测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升反应工作液
3． 加入xx微升底物液（Reagent E）
4． 放进25℃培养箱里静置3分钟
5． 加入100微升待测样品（注意：100微克细胞总蛋白；样品须溶解）
6． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
7． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：OD0分钟－OD5分钟
五、 计算样品活性
注意事项
1． 本产品为20次操作，包括1次背景对照测定
2． 操作时，须戴手套
3． 反应液B（Reagent D2）含有毒性物质，避免直接用手接触
4． 系统操作过程中，背景测定只需1次
5． 线粒体样品检测前，须溶解；建议冻存融解（－70℃至37℃）循环3次或使用线粒体溶解试剂盒－G&VS10018
6． 加入样品后3秒内即刻比色测定
7． 比色测定初始读数（0分钟读数）0.8左右为理想状态
8． 反应1分钟后比色测定值趋于稳定；测定值由高到低变化；测定持续5分钟
9． 测定值由高到低变化，即5分钟测定读数低于0分钟测定读数，表明有酶活性
10． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
11． 建议待测样本线粒体蛋白浓度为10微克/100微升和细胞总蛋白浓度为100微克/100微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；注意计算公式的调整（本公司提供线粒体溶解试剂盒G&VS10018为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
12． 活性计算时，可以选择5分钟内单位时间最大线性变化的吸光值
13． 琥珀酸脱氢酶单位活性定义为：在25℃，pH 7.5条件下，每分钟内能够还原1微摩尔氧化型二氯靛酚钠（DCIP）所需的酶量作为一个活性单位
14． 本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测准确
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10103.1 细胞琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS10103.1A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10103.1B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS10103.1C 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS10103.1D 反应液A（Reagent D1） 管
G&VS10103.1E 反应液B（Reagent D2） 毫升
G&VS10103.1F 底物液（Reagent E） 毫升
G&VS10103.1G 阴性液（Reagent F） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10103.1 | 细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10103.2 | 组织琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10103.3 | 线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10103.4 | 真菌/酵母琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10103.5 | 植物琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10156 | 分离线粒体纯度双酶法（SDH/AP）检测试剂盒 | 20次 |
上海极威生物科技有限公司 公司地址:上海市崇明县长兴镇潘园公路1800号2号楼9703室
邮箱：435399850@qq.com 电话：021-80186165 手机：16602115336
备案号：沪ICP备15046135号-7
