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盘基网柄菌（Dictyostelium）细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/7 9:19:17 阅读次数：15

盘基网柄菌（Dictyostelium）细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒

产品说明书

主要用途

盘基网柄菌（Dictyostelium）细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂是一种旨在采用遗传学技术级琼脂糖，构建化学趋化物（chemoattractant）弥散形成浓度差异的空间，观察细胞移动形态，进行活体外评价和半定量分析细胞趋化作用的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜盘基网柄菌，包括野生型和突变型，以及繁殖状态、饥饿状态等细胞的趋化性研究，同时检测趋化因子和抑制因子的作用。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简便，重复一致。

技术背景

趋化性（chemotaxis）是指细胞或生物体对于介质中的特定化学分子的浓度差异形成的刺激所引起的趋向运动。许多种类的游动细胞具有趋化性，例如细菌和阿米巴细胞朝着食物源移动；人体免疫细胞包括巨噬细胞和中性白细胞朝着外来入侵细胞移动；其它细胞受到化学信号吸引，移动到感染区域，参与免疫反应和创口修复。此外，许多在发育进程中发生的形态变化与细胞向化学物质浓度差异趋化移动相关。趋化性是细胞感受化学信号，由膜结合受体连接到细胞内传递机制，引发相应的反应。盘基网柄菌（Dictyostelium）又称细胞粘质霉（cellular slime mold），是一种真核微生物，土壤性阿米巴，其发育过程包括均匀单倍体细胞集落（homogenous lawn of cell）、迁移流动（streaming）、头形聚集（tipped aggregate）和子实体形成（fruiting body formation）等四个阶段。盘基网柄菌是研究细胞发育、趋化运动和信号传导的模式生物。其中趋化性在其发育过程中具有重要作用，例如环境变化，引起细胞有单细胞分裂转变为发育过程，通过感应信号分子cAMP，产生形态变化（morphogenesis）的运动现象。作为半固体介质之一的专用琼脂糖（Agarose），其性能稳定，操作简便，用以构建化学趋化物（chemoattractant）弥散形成浓度差异的空间，观察细胞移动形态，进行活体外检测是细胞趋化作用研究的基本手段。

产品内容

介质液（Reagent A）毫升

清理液（Reagent B）毫升

趋化液（Reagent C）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存趋化液（Reagent C）在-20℃的冰箱里，其余的保存在4℃的冰箱里；有效保证6月

用户自备

盘基网柄菌细胞HL-5培养基（G&VS12900）：用于细胞营养性繁殖

15毫升锥形离心管：用于混匀介质液的容器

35 mm细胞培养皿或6孔细胞培养板：用于细胞趋化实验的容器

台式离心机：用于收集细胞

细胞培养箱：用于细胞孵育

显微镜量尺：用于测量细胞移动距离

倒置显微镜：用于观察细胞趋化性

实验步骤

一、 琼脂平板准备

1．将介质液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出）

2．放进50℃恒温水浴均衡温度

3．最快速度分别移入4毫升（每孔4毫升）到6孔细胞培养板的每个孔里或35mm细胞培养皿

4．用手轻轻抖动，铺满整个底面，避免气泡产生

5．置于室温下至少2小时，使胶体凝固

6．取出培养板或培养皿，并倒置

7．在其外底面，用尺和标记笔做好标记：3毫米趋化物孔径，1.5毫米细胞孔径，5毫米趋化物孔与细胞孔孔距（孔边缘之间距离）――根据检测要求设置如下：

1）环圆形（可以在1个35mm培养皿建立4至5个环圆形）

2）直线形

8．按照底面的标记，使用经过严格修剪处理，且口径符合上述规定的200毫升枪头，进行平板挖孔，直至到达孔板底面。注意避免污染

二、细胞饥饿处理

1．准备10毫升营养性繁殖（使用HL5培养基）的盘基网柄菌细胞（例如野生型AX2细胞），细胞含量达5 X 10^5-6细胞/毫升

2．转移到15毫升锥形离心管

3．放进台式离心机离心5分钟，速度为700g

4．小心抽去上清液

5．加入xx毫升预冷的清理液（Reagent B），用枪头上下轻柔抽吸混匀

6．放进台式离心机离心5分钟，速度为700g

7．小心抽去上清液

8．重复实验步骤5至7一次

9．加入适量的清理液（Reagent B），用枪头上下轻柔抽吸混匀

10．调整细胞浓度为10⁷细胞/毫升

11．放进22℃摇床孵育6小时，速度为180RPM

12．放进台式离心机离心5分钟，速度为700g

13．小心抽去上清液

14．加入适量的清理液（Reagent B），用枪头上下轻柔抽吸混匀

15．调整细胞浓度为2.5 X 10⁸细胞/毫升

16．置于冰槽里备用

三、 趋化实验

1．加入xx微升清理液（Reagent B）或用户自备的空白对照液到规定的标记孔里（注意：不能溢出）

2．加入xx微升趋化液（Reagent C）或用户自备的化学趋化物（不同浓度或不同化学趋化物）（注意：不能溢出）

3．室温下静置15至30分钟，或直至胶体吸收上述液体

4．加入2微升上述准备的待测细胞（5 X 10⁵细胞）到相应的标记孔里

5．小心放进22℃培养箱孵育3至4小时，保持培养箱湿润

6．在倒置光学显微镜下观察（孵育期间或孵育结束后）：

1) 使用显微镜量尺进行细胞移动距离测量：细胞孔边缘和细胞移动前沿顶端之间的距离

2) 细胞密度计量：包括所有移动细胞，或设定移动区域的细胞

7．构建距离、密度、时间、趋化物浓度包括空白对照的关系曲线

8．确定趋化系数（chemokinesis coefficiency）：趋化物浓度和细胞移动密度的关系曲线的斜率

注意事项

1．本产品为10次（35 mm细胞培养皿或6孔细胞培养板）操作

2．其它实际操作的细胞培养瓶或细胞培养皿大小与试剂使用量按比例调整

3．所有培养操作和使用工具均须在严格无菌状态下进行

4．操作时须戴手套

5．用户可以检测野生型、突变型、营养繁殖细胞、饥饿细胞等趋化性；可以针对cAMP、叶酸（folic acid）等趋化因子的检测

6． 趋化液（Reagent C）为200微摩尔cAMP

7．如果细胞溅出，使用70%乙醇清除

8．平板打孔须精确，去掉琼脂糖（必要时可以使用真空抽吸），直到培养板（皿）底面

9．打孔完成后，即刻进行后续操作

10．实验可以在录像系统下实时操作和观察

11．建议使用系列趋化物浓度进行检测比较

12．建议待测细胞量为2.5-5 X 10⁵细胞/细胞孔

13．建议细胞为新鲜培养或饥饿处理

14．已经铺板但暂时保存的含凝胶体的培养板或培养皿，用PARAFILM密封，在4℃冰箱里储存

15．操作时小心轻柔，避免胶体脱位

16．通常野生型AX2细胞的cAMP趋化运动速率为10至15微米/分钟（3至4毫米/4小时）

17．细胞量过高，可见多层细胞移动现象

18．本公司提供系列细胞趋化分析试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定无病毒和支原体污染

3．本产品经鉴定重复率高

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10116 盘基网柄菌细胞趋化作用软琼脂检测试剂盒 10次

G&VS10116A 介质液（Reagent A）毫升

G&VS10116B 清理液（Reagent B）毫升

G&VS10116C 趋化液（Reagent C）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10115	动物细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒	10次
G&VS10116	盘基网柄菌（Dictyostelium）细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒	10次
G&VS15050	细菌细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒	10次