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动物细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/7 9:22:43 阅读次数：22

动物细胞趋化作用(chemotaxis)软琼脂检测试剂盒产品说明书
主要用途
动物细胞趋化作用(chemotaxis) 软琼脂检测试剂是一种旨在采用遗传学技术级琼脂糖，构建化学趋化物(chemoattractant) 弥散形成浓度差异的空间，观察细胞移动形态，进行活体外评价和半定量分析细胞趋化作用的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其特别适用于新鲜动物或人体中性白细胞或单核细胞，以及其它细胞包括肿瘤细胞的趋化性研究，同时检测趋化因子和抑制因子的作用。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简便，重复一致。

技术背景
趋化性(chemotaxis) 是指细胞或生物体对于介质中的特定化学分子的浓度差异形成的刺激所引起的趋向运动。许多种类的游动细胞具有趋化性，例如细菌和阿米巴细胞朝着食物源移动；人体免疫细胞包括巨噬细胞和中性白细胞朝着外来入侵细胞移动；其它细胞受到化学信号吸引，移动到感染区域，参与免疫反应和创口修复。此外，许多在发育进程中发生的形态变化与细胞向化学物质浓度差异趋化移动相关。趋化性是细胞感受化学信号，由膜结合受体连接到细胞内传递机制，引发相应的反应。作为半固体介质之一的专用琼脂糖(Agarose)，其性能稳定，操作简便，用以构建化学趋化物(chemoattractant) 弥散形成浓度差异的空间，观察细胞移动形态，进行活体外检测是细胞趋化作用研究的基本手段。

产品内容
介质液(Reagent A)
营养液(Reagent B)
重悬液(Reagent C)
固着液 A (Reagent D)
固着液 B (Reagent E)
染色液 A (Reagent F)
染色液 B (Reagent G)
清理液(Reagent H)
产品说明书

保存方式
保存在 4℃的冰箱里，避免光照。有效保证 6 月

用户自备
50 毫升锥形离心管：用于混匀介质液的容器
35 mm 细胞培养皿或 6 孔细胞培养板：用于细胞趋化实验的容器
恒温水浴：用于预热试剂
台式离心机：用于收集细胞
细胞培养箱：用于细胞孵育
显微镜量尺：用于测量细胞移动距离
倒置显微镜：用于观察细胞趋化性

实验步骤
实验开始前，将 4℃冰箱里的试剂盒中的所有试剂溶液放进37℃恒温水浴里预热。然后进行下列操作。
一、琼脂平板准备
1 ．将介质液(Reagent A) 置于微波炉里加热溶化(注意：避免溢出)
2 ．放进 50℃恒温水浴
3 ．移出 xx 毫升预热的营养液(Reagent B) 到 50 毫升锥形离心管
4 ．移出 xx 毫升介质液(Reagent A) 到上述 50 毫升锥形离心管
5 ．轻度涡旋震荡或用手摇动锥形离心管，充分混匀
6 ．最快速度分别移入 3 毫升(每孔 3 毫升) 到6 孔细胞培养板的每个孔里或 35mm 细胞培养皿
7 ．用手轻轻抖动，铺满整个底面，避免气泡产生
8 ．置于室温下或 37℃细胞培养箱至少 2 小时，使胶体凝固
9 ．取出培养板或培养皿，并倒置
10 ．在其外底面，用尺和标记笔做好标记： 3 毫米孔径， 5 毫米孔距(孔底边缘之间底距离) ――根据检测要求设置如下：
1)环圆形
趋化物孔
趋化物孔

2)直线形
细胞孔
空白对照孔
趋化物孔

11．按照底面的标记，使用经过严格修剪处理，且口径符合上述规定的 200 毫升枪头，进行平板挖孔，直至到达孔板底面。注意避免污染

二、细胞准备
1．准备 1 瓶 25cm2   细胞培养瓶里处于指数生长期的待测细胞或新鲜血液提取的白细胞，清洗，脱落，计数
2．移出 1 毫升(107细胞/毫升)到 1.5 毫升离心管
3．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g
4．小心抽去上清液
5．加入 xx 毫升预热的重悬液(Reagent C)，用枪头上下轻柔抽吸混匀
6．置于冰槽里备用

三、趋化实验
1．加入 10 微升用户自备的空白对照液到规定的标记孔里
2．加入 10 微升用户自备的化学趋化物(不同浓度或不同化学趋化物)
3．室温下静置 30 分钟
4．加入 10 微升上述准备的待测细胞到相应的标记孔里
5．小心放进 37℃二氧化碳细胞培养箱孵育 2 至 4 小时，保持培养箱湿润
6．在倒置光学显微镜下观察(孵育期间或孵育结束后)：
1)      使用显微镜量尺进行细胞移动距离测量：细胞孔边缘和细胞移动前沿顶端之间的距离
2)      细胞密度计量：包括所有移动细胞，或设定移动区域的细胞
7．构建距离、密度、时间、趋化物浓度包括空白对照的关系曲线
8．确定趋化系数(chemokinesis coefficiency)：趋化物浓度和细胞移动密度的关系曲线的斜率

四、细胞染色
1．孵育结束后，加入 xx 毫升固着液 A (Reagent D)，铺满整个培养孔或培养皿
2．室温下，孵育 30 分钟
3．小心倒掉固着液 A
4．加入 xx 毫升固着液 B (Reagent E)，铺满整个培养孔或培养皿
5．室温下，孵育 30 分钟
6．小心倒掉固着液 B
7．小心去掉软琼脂，避免刮掉底板上的细胞
8．小心加入 xx 毫升染色液 A (Reagent F)，铺满整个培养孔或培养皿
9．室温下孵育 1 分钟
10．小心抽掉染色液 A
11．小心加入 xx 毫升染色液 B (Reagent G)，铺满整个培养孔或培养皿
12．室温下孵育 1 分钟
13．小心抽掉染色液 B
14．小心加入 xx 毫升清理液(Reagent H)，铺满整个培养孔或培养皿
15．小心抽掉清理液
16．重复实验步骤 14 至 15 二次，或直至染色清晰
17．空气中晾干
18．在倒置光学显微镜下观察(孵育期间或孵育结束后)：
1)    使用显微镜量尺进行细胞移动距离测量
2)    细胞密度计量
19．构建距离、密度、时间、趋化物浓度的关系曲线
20．确定趋化系数(chemokinesis coefficiency)：趋化物浓度和细胞移动密度的关系曲线的斜率

注意事项
1．本产品为 10 次(35 mm细胞培养皿或 6 孔细胞培养板)操作
2．其它实际操作的细胞培养瓶或细胞培养皿大小与试剂使用量按比例调整
3．所有培养操作和使用工具均须在严格无菌状态下进行
4．操作时须戴手套
5．平板打孔须精确，去掉琼脂糖(必要时可以使用真空抽吸)，直到培养板(皿)底面
6．打孔完成后，即刻进行后续操作
7．实验可以在录像系统下实时操作和观察
8．建议使用系列趋化物浓度进行检测比较
9．建议待测细胞量为 105细胞/样品孔
10．建议细胞为新鲜培养或新鲜血液(2 至 3 小时内)提取
11．已经铺板但暂时保存的含凝胶体的培养板或培养皿，用 PARAFILM 密封，在4C冰箱里储存
12．操作时小心轻柔，避免胶体脱位
13．通常中性白细胞 2 小时可见细胞移动，其它细胞则 3 至 4 小时，甚至更长
14．细胞量过高，可见多层细胞移动现象
15．本公司提供系列细胞趋化分析试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定无病毒和支原体污染
3 ．本产品经鉴定重复率好

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号                            名称                                                                    规格
G&VS10115    动物细胞趋化作用(chemotaxis) 软琼脂检测试剂盒     10 次
G&VS10115A    介质液(Reagent A)                                                      100 毫升
G&VS10115B    营养液(Reagent B)                                                     100 毫升
G&VS10115C    重悬液(Reagent C)                                                     100 毫升
G&VS10115D    固着液 A (Reagent D)                                            100 毫升
G&VS10115E    固着液 B (Reagent E)                                              100 毫升
G&VS10115F    染色液 A (Reagent F)                                              100 毫升
G&VS10115G    染色液 B (Reagent G)                                              100 毫升
G&VS10115H    清理液(Reagent H)                                                  500 毫升

产品编号                  名称                                                                                                        规格
G&VS10115    动物细胞趋化作用(chemotaxis)软琼脂检测试剂盒                                   10 次
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