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体液总抗氧化能力比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间:2026/8/7 9:25:08      阅读次数:19

 

体液总抗氧化能力比色法定量检测试剂盒产品说明书

 

主要用途

体液总抗氧化能力(TAC)比色法定量检测试剂是一种旨在通过过硫酸钾的参与,使染料ABTS氧化,在抗氧化剂的存在下,通过分光光度仪,观察其峰值下降的变化,来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox总抗氧化能力,即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检测。产品严格无菌,即到即用,操作简易,性能稳定。

 

技术背景

超氧自由基阴离子superoxide radicalO2-)、过氧化氢(hydrogen peroxideH2O2)、羟自由基或氢氧基hydroxyl radicalOH-)、过氧化基(peroxyl radicalROO-)、氢过氧自由基(hydroperoxylHOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric OxideNO-、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anionONOO-次氯酸(hypochlorous acidHOCl)、半醌自由基semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen SpeciesROS)的产生和增多,将导致细胞衰老或凋亡,甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内,通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等,大分子,例如白蛋白、铜蓝蛋白(ceruloplasminCER)、铁蛋白(ferritin)和抗氧化因子,例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素(bilirubin)等,产生抗氧化能力,即捕获自由基的能力,达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾potassium persulfate)氧化2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulfonic acid)diammonium saltABTS产生的ABTS自由基,衡量体系中抗氧化剂捕获自由基或者消耗抗氧化剂的能力,在分光光度仪(730nm波长)的帮助下,观察其峰值下降的变化,并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

 

产品内容

缓冲液(Reagent A      毫升

染色液AReagent B1

染色液BReagent B2 毫升

氧化液(Reagent C      毫升

标准液(Reagent D      微升

产品说明书 1

 

保存方式

保存在-20冰箱里,有效保证6

 

用户自备

1.5毫升离心管:用于样品存放和标准品配制的容器

4微型台式离心机:用于样品处理

96孔板:用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪:用于比色变化

 

实验步骤

一、 样品准备

选择一:血浆样品

1. 准备好肝素或ACD抗凝管(注意:避免使用EDTA抗凝管

2. 抽取1毫升血液,置于抗凝管里

3. 放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为700g(或3000RPM,例如eppendorf 5415

4. 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分(注意:避免触碰白色液体层

5. 即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存

6. 移取10微升上述制备的血浆到新的1.5毫升离心管

7. 加入xx微升缓冲液(Reagent A),混匀

8. 放在冰槽里待测

 

选择二:血清样品

1 准备好不含抗凝剂的储存管

2. 抽取1毫升血液,置于储存管里

3. 室温下,静置30分钟,直至血液凝结

4. 放进4℃微型台式离心机离心15分钟,速度为2000g(或5000RPM,例如eppendorf 5415

5. 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分(注意:避免触碰白色液体层

6. 即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存

7. 移取10微升上述制备的血清到新的1.5毫升离心管

8. 加入xx微升缓冲液(Reagent A),混匀

9. 放在冰槽里待测

 

选择三:尿液/脑脊液/唾液/精液样品 

1. 准备好1.5毫升离心管

2. 移取1毫升液体到离心管

3. 放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为700g(或3000RPM,例如eppendorf 5415

4. 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管

5. 即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存

6. 移取10微升到新的1.5毫升离心管

7. 加入xx微升缓冲液(Reagent A),混匀

8. 放在冰槽里待测

 

二、标准液准备

1. 准备好51.5毫升离心管,标记为15号管

2. 移取xx微升标准液(Reagent D1号管

3. 小心移取xx微升缓冲液(Reagent Axx微升标准液(Reagent D2号管,混匀

4. 小心移取xx微升缓冲液(Reagent Axx微升标准液(Reagent D3号管,混匀

5. 小心移取xx微升缓冲液(Reagent Axx微升标准液(Reagent D4号管,混匀

6. 小心移取xx微升缓冲液(Reagent A5号管

7. 15号管放进冰槽里备用,避免光照;标准管浓度见下表

 

管号

缓冲液(Reagent A

标准液(Reagent D

测定体系

标准 Trolox浓度

1

xx微升

xx微升

xx微摩尔/

2

xx微升

xx微升

xx微摩尔/

3

xx微升

xx微升

xx微摩尔/

4

xx微升

xx微升 

xx微摩尔/

5

xx微升

0

0

 

三、 样品测读

实验开始前,将-20冰箱里的试剂置于室温下融化,移取xx毫升染色液BReagent B21染色液AReagent B1里,混匀,置于暗室里室温下孵育过夜(16小时)后,标记为染色工作液避免光照。然后进行下列操作。

1. 准备196孔板,做好标记:空白对照孔、标准对照孔、样品孔

2. 分别移取xx微升缓冲液(Reagent A96孔板里的每个孔里

3. 分别加入xx微升染色工作  

4. 分别加入xx微升氧化液(Reagent C

5. 加入xx微升缓冲液(Reagent A空白对照孔

6. 加入xx微升上述配制的标准液(Reagent D到相应标准对照孔里

7. 加入10微升体液样品到样品孔里

8. 轻轻摇动96孔板,使其混匀

9. 室温下孵育1分钟

10. 即刻放进酶标仪里测读:730nm波长

11. 分析结果:

1) 构建标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光单位(OD730nm);横座标(X轴)为标准Trolox浓度(微摩尔/升)

2) 空白对照孔为最大吸光单位(OD730nm)读数

3) 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位(OD730nm)读数

4) 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度(微摩尔/升)

5) 计算样品实际总抗氧化能力

 

 

6) 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力(实际抑制百分率)

 

7) IC5050%抑制率所需的样品单位:TROLOX等值或样品蛋白浓度(毫克/毫升)或样品容量(微升)

 

 

注意事项

1. 本产品为50次操作

2. 本产品测试范围为高浓度30150微摩尔

3. 操作时,须戴手套

4. 体液制备的所有操作均须在4状态下进行

5. 测试前,样品须处于新鲜收集

6. 样品须清澈

7. 样品避免含有TrisEDTA和还原剂等

8. 空白对照孔的吸光读数应为2.0以上,如果低于1.5,不能用于高浓度检测,须增加染色工作液的室温孵育时间

9. 染色工作液避免反复在室温空气中久置。如果空白对照孔的吸光读数为3.5以上,建议使用无离子水稀释到2.53.0则可

10. 样品读数越低,抗氧化能力越高

11. 样本量不宜超过20微升

12. 可以使用比色皿检测

13. 如果样品抗氧化剂浓度过高或过低, 建议稀释或增加样品浓度

14. 如果测试样品很多,建议使用排枪移液

15. 如果用户没有730nm波长滤波器,可以使用640nm810nm之间的任一波长替代;或者使用405nm波长替代

16. 人体体液的总抗氧化能力在0.22毫摩尔标准水溶性生育酚Trolox的浓度

17. 本公司提供低浓度测试试剂产品

18. 本公司提供系列抗氧化分析试剂产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定检测敏感

 

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着信誉至上、客户满意、质量承诺的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORKRECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

 

订购信息

单组分订购信息

编号               名称                 规格

G&VS10114.4   体液总抗氧化能力比色法定量检测试剂       50

G&VS10114.4A   缓冲液(Reagent A                毫升

G&VS10114.4B   染色液AReagent B1              

G&VS10114.4C    染色液BReagent B2                毫升

G&VS10114.4D   氧化液(Reagent C                   毫升

G&VS10114.4E    标准液(Reagent D                   毫升

 

试剂盒订购信息

产品编号

名称

规格

G&VS10053.1

细胞总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50

G&VS10053.2

组织总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50

G&VS10053.3

食物总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50

G&VS10053.4

体液总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50

G&VS10114.1

细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50

G&VS10114.2

组织总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50

G&VS10114.3

食物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50

G&VS10114.4

体液总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50

G&VS10131.1

细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量检测试剂盒

50

G&VS10131.2

组织总抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量检测试剂盒

50

G&VS10131.3

食物总抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量检测试剂盒

50

G&VS10131.4

体液总抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量检测试剂盒

50

 


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