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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细胞总抗氧化能力比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/7 13:04:40 阅读次数：17

细胞总抗氧化能力比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

细胞总抗氧化能力（TAC）比色法定量检测试剂是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种细胞（动物、人体、昆虫等）的总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾（potassium persulfate）氧化2,2’-连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulfonic acid)，diammonium salt；ABTS）产生的ABTS自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

低渗液（Reagent B）毫升

缓冲液（Reagent C）毫升

染色液A（Reagent D1）管

染色液B（Reagent D2）毫升

氧化液（Reagent E）毫升

标准液（Reagent F）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

2毫升离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品存放和标准样品配制的容器

细胞刮脱棒：用于脱离细胞

4℃微型台式离心机：用于样品操作

超声仪：用于破碎细胞

96孔板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

一、 样品准备

1．准备好25cm²细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 10⁶细胞）

2．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面

3．小心抽去清理液

4．使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）

5．加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞

6．移入到预冷的2毫升离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）

7．放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g

8．小心抽去上清液

9．加入xx微升低渗液（Reagent B），混匀

10．置于200瓦超声仪枪头下，离心管在冰槽里

11．超声功率为100％，猝击10秒，2个循环

12．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g（或10000RPM，例如eppendorf 5415）

13．移取上清液到新的4℃预冷的1.5毫升离心管

14．移取10微升进行蛋白定量检测（建议使用 BCA蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30031.1）

15．使用清理液（Reagent A）调整蛋白浓度为100微克/10微升

16．置于冰槽里待测

二、标准液准备

1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

2．移取xx微升标准液（Reagent F）到1号管

3．小心移取xx微升缓冲液（Reagent C）和xx微升标准液（Reagent F）到2号管，混匀

4．小心移取xx微升缓冲液（Reagent C）和xx微升标准液（Reagent F）到3号管，混匀

5．小心移取xx微升缓冲液（Reagent C）和xx微升标准液（Reagent F）到4号管，混匀

6．小心移取xx微升缓冲液（Reagent C）到5号管

7．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	缓冲液（Reagent C）	标准液（Reagent F）	测定体系标准 Trolox浓度
1	0微升	xx微升	xx微摩尔/升
2	xx微升	xx微升	xx微摩尔/升
3	xx微升	xx微升	xx微摩尔/升
4	xx微升	xx微升	xx微摩尔/升
5	xx微升	0	0

三、 样品测读

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，移取xx毫升染色液B（Reagent D2）到1管染色液A（Reagent D1）里，混匀，置于暗室里室温下孵育过夜（16小时）后，标记为染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。

1．准备1个96孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔

2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到96孔板里的每个孔里

3．分别加入20微升染色工作液

4．分别加入xx微升氧化液（Reagent E）

5．加入xx微升缓冲液（Reagent C）到空白对照孔

6．加入xx微升上述配制的标准液（Reagent F）到相应标准对照孔里

7．加入10微升细胞裂解样品（100微克蛋白总量）到样品孔里

8．轻轻摇动96孔板，使其混匀

9．室温下孵育1分钟

10．即刻放进酶标仪里测读：730nm波长

11．分析结果：

1）构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD730nm）；横座标（X轴）为标准Trolox浓度（微摩尔/升）

2）空白对照孔为最大吸光单位（OD730nm）读数

3）标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD730nm）读数

4）根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）

5）计算样品实际总抗氧化能力

【根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）X 0.25（体系容量；毫升） X 样品稀释倍数】÷0.01（样品容量；毫升）＝（微摩尔/升TROLOX等值）

6）根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）

【（空白对照孔吸光单位读数－实际吸光单位读数）÷空白对照孔吸光单位读数】X100％

7） IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX等值或样品蛋白浓度（毫克/毫升）或样品容量（微升）

X（所需样品单位）＝（已知样品单位÷实际抑制百分率）X 50％

注意事项

1．本产品为50次操作

2．本产品测试范围为高浓度30至150微摩尔

3．操作时，须戴手套

4．样品制备的所有操作均须在4℃状态下进行

5．测试前，样品须新鲜收集

6．样品须清澈

7．样品避免含有Tris、EDTA和还原剂等

8．空白对照孔的吸光读数应为2.0以上，如果低于1.5，不能用于高浓度检测，须增加染色工作液的室温孵育时间

9．染色工作液避免反复在室温空气中久置。如果空白对照孔的吸光读数为3.5以上，建议使用无离子水稀释到2.5至3.0则可

10．样品读数越低，抗氧化能力越高

11．样本量不宜超过20微升

12．可以使用比色皿检测

13．如果样品抗氧化剂浓度过高或过低，建议稀释或增加样品浓度

14．如果测试样品很多，建议使用排枪移液

15．如果用户没有730nm波长滤波器，可以使用640nm至810nm之间的任一波长替代；或者使用405nm波长替代

16．本公司提供低浓度测试试剂产品

17．本公司提供系列抗氧化分析试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10114.1 细胞总抗氧化能力比色法定量检测试剂盒 50次

G&VS10114.1A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10114.1B 低渗液（Reagent B）毫升

G&VS10114.1C 缓冲液（Reagent C）毫升

G&VS10114.1D 染色液A（Reagent D1）管

G&VS10114.1E 染色液B（Reagent D2）毫升

G&VS10114.1F 氧化液（Reagent E）毫升

G&VS10114.1G 标准液（Reagent F）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10053.1	细胞总抗氧化能力（TAC）化学发光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10053.2	组织总抗氧化能力（TAC）化学发光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10053.3	食物总抗氧化能力（TAC）化学发光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10053.4	体液总抗氧化能力（TAC）化学发光法定量检测试剂盒	50次
G&VS10114.1	细胞总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒	50次
G&VS10114.2	组织总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒	50次
G&VS10114.3	食物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒	50次
G&VS10114.4	体液总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒	50次
G&VS10131.1	细胞总抗氧化能力（TAC）比色法（DDPH）定量检测试剂盒	50次
G&VS10131.2	组织总抗氧化能力（TAC）比色法（DDPH）定量检测试剂盒	50次
G&VS10131.3	食物总抗氧化能力（TAC）比色法（DDPH）定量检测试剂盒	50次
G&VS10131.4	体液总抗氧化能力（TAC）比色法（DDPH）定量检测试剂盒	50次