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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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活体细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/10 14:07:08 阅读次数：17

主要用途

活体细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂羟苯基荧光素，与细胞内羟自由基的反应，产生绿色荧光，来测定细胞内羟自由基活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子(superoxide radical；O2- )、过氧化氢(hydrogen peroxide；H2O2)、羟自由基或氢氧基 (hydroxyl radical；OH- )、过氧化基(peroxyl radical；ROO- )、氢过氧自由基(hydroperoxyl；HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide；NO- )、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion；ONOO- ) 次氯酸(hypochlorous acid；HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species；ROS) 的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。其中羟自由基或氢氧基具有极度反应性和毒性，同时半衰期短(10－9至10－10秒)。其产生主要是水分子受到高能量放射后裂解、过氧化物和次氯酸反应、过氧化氢的还原、超氧化物的歧化等形成。羟苯基荧光素(Hydroxyphenyl fluorescein；2-[6-(4’-Hydroxy)phenoxy-3H-xanthen-3-on-9-yl]benzoic acid；HPF) 是一种完全自由通过细胞膜的染色剂，一旦与羟自由基反应，产生脱苄基(o-dearylation) 作用，生成强烈荧光的荧光素(fluorescein)。据此证明细胞内羟自由基活性氧族的存在。

产品内容

清理液(Reagent A)

染色液(Reagent B)

稀释液(Reagent C)

保存液(Reagent D)

产品说明书

保存方式

毫升

微升

毫升

1份

保存染色液(Reagent B)在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月

用户自备

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离

完全细胞培养液(G&VS12052)：用于细胞操作所需的培养基

15 毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器

1.5 毫升离心管：用于细胞染色的容器培养箱：用于反应孵育

血细胞计数仪：用于细胞计数

台式离心机：用于样品操作

比色皿或 96 孔板：用于荧光定量分析的容器

细胞流式仪：用于细胞荧光分析

(共聚焦)荧光显微镜：用于观察荧光细胞

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于细胞荧光定量分析

实验步骤

一、间接法

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化，稀释液(Reagent C) 放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出 xx 微升染色液(Reagent B) 到新的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升稀释液(Reagent C)，混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。

1 ．准备 1 瓶 25cm2细胞培养瓶的待测细胞

2 ．小心抽去细胞培养液

3 ．加入 xx 毫升清理液(Reagent A) 到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面

4 ．小心抽去清理液(Reagent A)

5 ．加入 xx 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面

6 ．置入 37℃培养箱 1 分种

7 ．振动培养瓶，使细胞脱落

8 ．加入 xx 毫升用户自备的完全细胞培养液

9 ．移入 15 毫升锥形离心管，充分混匀(注意： 悬浮细胞直接从这一步骤开始)

10．移取 10 微升在血细胞计数仪上进行细胞计数

11．移出 1 X 106细胞到新的 15 毫升锥形离心管

12．放入台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

13．小心抽去上清液

14．加入 xx 毫升清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群

15．小心抽去清理液(Reagent A)

16．加入 xx 毫升含有染色液(Reagent B) 和稀释液(Reagent C) 的染色工作液，轻柔混匀

17．放进 37℃恒温水槽孵育 30 分钟，避免光照

18．放入台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

19．小心抽去上清液

20．加入预冷的 xx 微升保存液(Reagent D)，轻柔混匀细胞颗粒群

21．放进冰槽里

22 ．选择下列方式之一进行操作：

a) 即刻进行细胞流式仪分析：波长 488nm 氩离子激光，观察 50000 个细胞以上―― 波峰右移，表明羟自由基含量高

b) 或使用(共聚焦)荧光显微镜观察(定性检测)： 1)移取 10 微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片

2)激发波长 499nm，散发波长 515nm――

绿色荧光增强，表明羟自由基含量高

c) 或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测(定量检测)：

1)移取 400 微升上述细胞悬液到 1 毫升比色皿

2)加入 600 微升保存液(Reagent D)

3)上下倾倒混匀数次

4)放进荧光分光光度仪：激发波长 499nm，散发波长 515nm――

RFU增高，表明羟自由基含量高

二、直接法

1．准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％

(注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿， 35mm 培养皿，和其它培养孔板，见注意事项5)

2．小心抽去细胞培养液

3．小心沿着孔壁加入 xx 微升清理液(Reagent A) 到 1 个细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4．小心抽去清理液(Reagent A)

5．小心沿着孔壁加入 xx 微升含有染色液(Reagent B) 和稀释液(Reagent C) 的染色工作液到 1 个细胞培养孔，覆盖培养孔表面

6．放进 37℃细胞培养箱里孵育 30 分钟

7．小心抽去含有染色工作液

8．小心沿着孔壁加入 xx 微升 37℃预热的保存液(Reagent D) 到细胞培养孔

9．选择下列方式之一进行操作：

(A)使用倒置荧光显微镜观察(定性检测)：

激发波长 499nm，散发波长 515nm――绿色荧光增强，表明羟自由基含量高

(B) 使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测(定量检测)：

放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发波长 499nm，散发波长 515nm――RFU增高，表明羟自由基含量高

注意事项

1 ．本产品为 20 次(1毫升体系)或 40 次(0.5 毫升体系)操作

2 ．操作时，须戴手套

3 ．样品避免使用 DMSO 处理

4 ．孵育时，避免光照

5 ．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿， 35mm 培养皿，和各种培养孔板，须相应调整操作用量：

操作容器	操作用量
载玻片	100 微升
载玻片培养皿	1 毫升
35mm 培养皿	1 毫升
96 孔培养板	100 微升
48 孔培养板	200 微升
24 孔培养板	500 微升
12 孔培养板	1 毫升
6 孔培养板	2 毫升
25cm2细胞培养瓶	3 毫升

6 ．根据细胞类型，调整染色工作液使用剂量(1：200 至 1 ：1000 容量比)，避免过度染色

7 ．如果羟自由基浓度过低，可以延长孵育时间至 60 分钟

8 ．建议细胞染色完成后，即刻进行细胞荧光分析

9 ．激发波长可以选择在 485 至 500nm，散发波长 505 至 550nm 之间的任一波长

10．本公司同时提供系列羟自由基活性氧检测试剂产品

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能稳定

2 ．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号	名称	规格
G&VS10124. 1	活体细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒	20 次
G&VS10124. 1A	清理液(Reagent A)	500 毫升
G&VS10124. 1B	染色液(Reagent B)	1 毫升
G&VS10124. 1C	稀释液(Reagent C)	100 毫升
G&VS10124. 1D	保存液(Reagent D)	100 毫升
G&VS12024	胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液	100/500 毫升
G&VS12052	DMEM 完全细胞培养液	500 毫升

产品编号	名称	规格
G&VS10124. 1	活体细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒	20 次
G&VS10124.2	冰冻切片氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒	20 次
G&VS10124.3	细胞氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒	20 次
G&VS10124.4	组织氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒	20 次
G&VS10124.5	体液氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒	20 次
G&VS10124.6	酵母氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒	20 次
G&VS10124.	植物氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒	20 次