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发布时间：2026/8/10 14:19:28 阅读次数：22
植物氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
植物氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂是一种旨在通过捕获剂二甲基亚砜，受到羟自由基的氧化，进而与偶氮染料反应，产生黄色产物，由分光光度仪比色分析，来定量检测植物组织细胞内羟自由基活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等）等的羟自由基检测，以及羟自由基激发剂和抗氧化清除剂（scanvenger）等的检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致植物气孔关闭（stomatal closure）和根毛发育（root hair）异常等病理状况。其中羟自由基或氢氧基具有极度反应性和毒性，同时半衰期短（10－9至10－10秒）。其产生主要是水分子受到高能量放射后裂解、过氧化物和次氯酸反应、过氧化氢的还原、超氧化物的歧化等形成。使用二甲基亚砜（dimethy sulfoxide；DMSO），作为羟自由基的分子探针，捕获羟自由基，并被氧化为甲基亚磺酸（methane sulfinic acid；MSA），在偶氮染料（diazonium dye）的作用下，产生黄色产物偶氮亚砜（diazosulfone），通过分光光度仪（420nm波长）检测，以测定羟自由基的含量。据此证明植物组织细胞内活性氧族的存在。其反应系统为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
标记液（Reagent B） 微升
酸性液（Reagent C） 毫升
染色液（Reagent D） 瓶
净化液（Reagent E） 毫升
终止液（Reagent F） 毫升
萃取液（Reagent G） 毫升
稳定液（Reagent H） 毫升
标准液（Reagent I） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液（Reagent D）和标准液（Reagent I）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；酸性液（Reagent C）和净化液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全；净化液（Reagent E）、终止液（Reagent F）、萃取液（Reagent G）和稳定液（Reagent H）容易挥发，注意密闭；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品和标准液操作的容器
2.2毫升离心管：用于样品操作的容器
5毫升玻璃管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
DOUNCE匀浆器：用于组织细胞裂解
（微型）台式离心机：用于样品操作
1毫升1厘米光径石英或玻璃比色皿：用于比色分析的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
一、样品准备
1． 备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定500毫克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入预冷的xx毫升清理液（Reagent A）
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）
9． 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
10． 强力涡旋震荡5秒，充分混匀
11． （选择步骤）在冰槽里，置于200瓦超声仪下，功率50％，猝击5秒
12． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
13． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管
14． （选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
15． （选择步骤）移取5微升进行蛋白定量测定，并调整蛋白浓度为20毫克/毫升（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16． 置于冰槽里继续后续操作（1小时内）
二、标准样品配制
1． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
2． 分别加入xx微升清理液（Reagent A）到2至5号管
3． 移取xx微升标准液（Reagent I）到1号管
4． 小心移取xx微升1号管的标准液（Reagent I）到2号管，混匀
5． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent I）到3号管，混匀
6． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent I）到4号管，混匀
7． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
| 管号 | 清理液（Reagent A） | 标准液（Reagent I） | 测定体系标准MSA浓度 |
| 1 | － | xx微升 | 100微摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | 50微摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | 25微摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | 12.5微摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 0 | 0 |
三、 标准曲线测定
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent D）置入室温下，然后移出xx毫升清理液（Reagent A）到染色液（Reagent D）瓶里，混匀后，加入xx毫升净化液（Reagent E），混匀后，移取5毫升上层液相到新的10毫升瓶里（注意：使用PE或玻璃瓶），标记为染色工作液，使用锡箔纸包裹避光，置于冰槽里备用（注意：可以使用6次）。 然后进行下列操作
1． 移取xx微升上述配制的标准液（Reagent I）到5毫升玻璃管
2． 加入xx微升酸性液（Reagent C）
3． 加入xx微升染色工作液，混匀
4． 室温下孵育10分钟，避免光照
5． 加入xx毫升终止液（Reagent F）
6． 涡旋震荡1秒
7． 静置分层
8． 移取1毫升上层液相到新的2.2毫升离心管
9． 加入xx毫升萃取液（Reagent G）
10． 涡旋震荡1秒
11． 静置分层
12． 小心移取1毫升上层液相到新的比色皿
13． 加入xx微升稳定液（Reagent H）
14． 上下倾倒混匀
15． 即刻放进分光光度仪（420nm波长）检测：获得吸光读数
16． 重复实验步骤1至15四次
17． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准MSA浓度（微摩尔/升）
四、 样品测定
1． 移取400微升待测样品到5毫升玻璃管
2． 加入xx微升标记液（Reagent B）
3． 涡旋震荡5秒
4． 室温下孵育30分钟
5． 加入xx微升酸性液（Reagent C）
6． 加入xx微升染色工作液，混匀
7． 室温下孵育10分钟，避免光照
8． 加入xx毫升终止液（Reagent F）
9． 涡旋振荡1秒
10． 静置分层
11． 移取1毫升上层液相到新的2.2毫升离心管
12． 加入xx毫升萃取液（Reagent G）
13． 涡旋震荡1秒
14． 静置分层
15． 小心移取1毫升上层液相到新的比色皿
16． 加入xx微升稳定液（Reagent H）
17． 上下倾倒混匀
18． 即刻放进分光光度仪（420nm波长）检测：获得吸光读数
19． 根据标准曲线获得样品对应MSA浓度，即羟自由基浓度（微摩尔/升）
20． 计算样品实际MSA浓度，即羟自由基浓度（微摩尔/升）
【根据标准曲线获得样品对应MSA浓度（微摩尔/升）X 1.2（体系容量；毫升）X 样品稀释倍数】÷0.4（样品容量；毫升）
21． 或构建细胞内活性氧生成曲线：纵座标（Y轴）为羟自由基活性氧吸光值（OD）；横坐标（X轴）为组织量、蛋白量、时间点或药物处理浓度等
注意事项
1． 本产品为20次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 酸性液（Reagent C）和净化液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全
4． 净化液（Reagent E）、终止液（Reagent F）和萃取液（Reagent G）和稳定液（Reagent H）容易挥发，注意密闭
5． 建议染色工作液现配现用为佳
6． 孵育时，避免光照
7． 建议使用新鲜样品
8． 建议使用1毫升1厘米光径石英或玻璃比色皿
9． 本产品适合抗氧化能力检测
10． 本公司同时提供系列羟自由基活性氧检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10124.7 植物氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS10124.7A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10124.7B 标记液（Reagent B） 毫升
G&VS10124.7C 酸性液（Reagent C） 毫升
G&VS10124.7D 染色液（Reagent D） 瓶
G&VS10124.7E 净化液（Reagent E） 毫升
G&VS10124.7F 终止液（Reagent F） 毫升
G&VS10124.7G 萃取液（Reagent G） 毫升
G&VS10124.7H 稳定液（Reagent H） 毫升
G&VS10124.7I 标准液（Reagent I） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10124.1 | 活体细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒 | 20次 |
| G&VS10124.2 | 冰冻切片氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒 | 20次 |
| G&VS10124.3 | 细胞氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10124.4 | 组织氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10124.5 | 体液氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10124.6 | 酵母氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10124.7 | 植物氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS10124.8 | 细菌氧化应激活性氧羟自由基比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
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