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活体组织氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/11 9:12:48 阅读次数：19

活体组织氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂盒产品说明书

主要用途

活体组织氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂氨苯基荧光素，与组织细胞内次氯酸阴离子的反应，产生绿色荧光，来测定组织细胞内次氯酸活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适宜于活体动物组织的次氯酸阴离子分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。次氯酸阴离子与细胞膜成分反应，氧化质膜上氢硫基团，通过胺和不饱和脂肪酸的氯离子化和破坏铁硫中心，达到干扰细胞功能，包括葡萄糖和氨基酸转运和钾泵能力。氨苯基荧光素（Aminophenyl fluorescein；2-[6-(4’-Amino) phenoxy-3H-xanthen-3-on-9-yl]benzoic acid；APF）是一种完全自由通过细胞膜的荧光染色剂，选择性与次氯酸阴离子反应，生成强烈荧光的荧光素（fluorescein），同时在羟苯基荧光素（Hydroxyphenyl fluorescein；2-[6-(4’-Hydroxy) phenoxy-3H-xanthen-3-on-9-yl]benzoic acid；HPF）的对比存在下，排除其它活性氧族的干扰。据此证明组织细胞内次氯酸活性氧族的存在。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

染色液（Reagent B）微升

本底液（Reagent C）微升

稀释液（Reagent D）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent B）和本底液（Reagent C）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

50毫升锥形离心管：用于组织收集的容器

15毫升锥形离心管：用于工作液配制和组织处理的容器

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器

6孔细胞培养板：用于组织染色的容器

培养箱或恒温水槽：用于染色孵育

荧光显微镜：用于观察荧光组织

荧光分光光度仪：用于组织荧光定量检测

实验步骤

方法一：新鲜组织薄片定性检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）和本底液（Reagent C）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent D）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的15毫升锥形离心管，加入xx毫升稀释液（Reagent D），混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里；同时移出xx微升本底液（Reagent C）到新的15毫升锥形离心管，加入xx毫升稀释液（Reagent D），混匀后，标记为本底工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。

1．手术取出动物组织

2．放进预冷的50毫升锥形离心管

3．加入xx毫升清理液（Reagent A）浸泡15秒

4．用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5．即刻用刀片切离组织为1cm X 1cm大小的片状组织

6．分别用镊子将2片组织薄片放进6孔培养板的2个孔里，标记为样品孔和本地孔

7．加xx毫升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent D）的染色工作液到样品孔里

8．加入xx毫升含有本底液（Reagent C）和稀释液（Reagent D）的本底工作液到本底孔里

9．放进37℃培养箱孵育30分钟，避免光照（注意：如果组织薄片较厚，可以增加孵育时间至60分钟）

10．分别小心抽去染色工作液和本底工作液

11．分别加入xx毫升清理液（Reagent A）

12．分别用镊子将组织薄片放在载玻片上

13．压片

14．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察：激发波长499nm，散发波长515nm――（样本绿色荧光—本底绿色荧光）增强，表明次氯酸阴离子含量高

方法二：组织匀浆定量检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）和本底液（Reagent C）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent D）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent D），混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里；同时移出xx微升本底液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent D），混匀后，标记为本底工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。

1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量100毫克

2．放进预冷的50毫升锥形离心管

3．加入xx毫升清理液（Reagent A）

4．用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5．即刻用刀片切碎组织

6．放进一个预冷的15毫升锥形离心管

7．加入xx毫升预冷的稀释液（Reagent D）

8．涡旋震荡5秒，充分混匀

9．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

10．在冰槽里用研磨棒匀化组织（注意：切莫过度匀化）

11．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管

12．置入冰槽里备用

13．移取5微升组织匀浆物进行蛋白定量检测：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒（G&VS30030.1）

14．分别移取50微升组织匀浆物（样品：100微克蛋白）到2个1.5毫升离心管，标记为样品管和本底管

15．加入xx微升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent D）的染色工作液到样品管，混匀

16．加入xx微升含有本底液（Reagent C）和稀释液（Reagent D）的本底工作液到本底管，混匀

17．放进37℃恒温水槽孵育30分钟，避免光照

18．即刻放进荧光分光光度仪检测：激发波长499nm，散发波长515nm——（样本RFU—本底RFU）增高，表明次氯酸阴离子含量高

注意事项

1．本产品为20次（组织匀浆）或8次（组织薄片）操作，包括背景对照

2．建议使用新鲜组织，手术切除后1小时内的样品

3．操作时，须戴手套

4． 染色工作液和本底工作液配制后1小时内使用为佳，避免光照

5．孵育时，须避免光照

6．如果组织薄片较厚，可以增加孵育时间至60分钟

7．组织匀浆时，切莫过度

8．建议组织染色完成后，即刻进行荧光定性分析

9．根据细胞类型，同步调整染色工作液和本底工作液使用剂量（1：200至1：1000容量比），避免过度染色

10．激发波长可以选择在485至500nm，散发波长505至550nm之间的任一波长

11．本公司同时提供系列次氯酸活性氧检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10135.5 活体组织氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂盒 8/20次

G&VS10135.5A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10135.5B 染色液（Reagent B）微升

G&VS10135.5C 本底液（Reagent C）微升

G&VS10135.5D 稀释液（Reagent D）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10135.1	细胞内氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂盒	20次
G&VS10135.2	冰冻切片氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂盒	20次
G&VS10135.3	真菌/酵母氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂盒	20次
G&VS10135.4	植物氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂盒	20次
G&VS10135.5	活体组织氧化应激活性氧次氯酸离子荧光测定试剂盒	20次