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发布时间：2026/8/11 9:21:22 阅读次数：18
ANNEXIN V-FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒产品说明书
主要用途
ANNEXIN V-FITC 标记法细胞凋亡检测试剂是一种旨在使用异硫氰酸荧光素标记的膜粘连蛋白 -5 (Annexin V)，探寻细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻移位，来分析特征性早期细胞凋亡状况的权威而经典的 技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞(动物、人体、 植物等)的细胞凋亡测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感， 操作简捷， 性能稳定。
技术背景
细胞凋亡， 或细胞程序性死亡，在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物 学过程中，起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。抗凝血蛋白膜粘连蛋白-5 (Annexin V)是 35 至 36kd 的钙离子依赖性磷脂结合蛋白，主要与磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine；PS)可逆性结合，每个分子 Annexin V 结合 50 个单体磷脂酰丝氨酸。在正常生理状态下，磷脂酰丝氨酸，是四种主要细胞膜磷脂成分之一，和磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine；PE) 一起分布在细胞质膜的内侧，即面向胞浆的一面。一旦细胞凋亡启动，细胞膜失去了磷脂双层的非对称性分布和完整性，导致 磷脂酰丝氨酸移位到细胞膜外侧，成为巨噬细胞的识别目标， 由此细胞膜外侧的磷脂酰丝氨酸可以通过异硫氰酸荧光素(FITC)标记的 Annexin V 进行探测。伴随碘化丙啶(Propidium iodide；PI)的染色以区别晚期细胞凋亡。碘化丙啶为膜非通透性染料，受到活细胞排外，如果细胞处于晚期凋亡或死亡，则呈现红 色荧光的细胞核。借助细胞流式仪，可以清晰探测细胞凋亡的程度。流式细胞术(FLOW CYTOMETRY) 是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。
产品内容
清理液(Reagent A)
反应液(Reagent B)
染色液(Reagent C)
复染液(Reagent D)
产品说明书
保存方式
保存 染色液(Reagent C)和 复染液(Reagent D)在－20℃冰箱里，避免反复冻融； 其余的保存在 4℃冰箱里，避免光照；有效保证 6 月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离
完全细胞培养液(G&VS12052)：用于中和胰蛋白酶的处理
15 毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
1.5 毫升离心管：用于细胞染色的容器
台式离心机：用于细胞收集的操作
微型台式离心机：用于细胞收集的操作
荧光显微镜：用于细胞荧光观察
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20 冰箱里的试剂置于室温下冻融。移取 xx 微升 反应液(Reagent B) 到 1.5 毫升离心管，然后分别加入 xx 微升 染色液(Reagent C) 和 复染液(Reagent D)， 混匀后，标记为 染色工作液，置于冰槽里，放进暗室里备用。然后进行下列操作。
一、 直接法
1 ． 准备 1 个细胞培养 6 孔板， 内置 1 个细胞 1 X 1 cm 大小的载玻片
2 ． 接种待测细胞培养，直至每孔铺满率达 70％
3 ． 小心抽去细胞培养液
4 ． 轻轻加上 xx 微升 清理液(Reagent A) 到细胞载玻片上，覆盖样品表面
5 ． 小心抽去 清理液(Reagent A)
6 ． 小心加上 xx 微升 染色工作液， 覆盖样品表面
7 ． 在暗室里室温下孵育 15 分钟
8 ． 小心抽去 染色工作液
9 ． 轻轻加上 xx 微升 反应液(Reagent C) 到细胞载玻片上，覆盖样品表面
10．小心抽去 反应液(Reagent C)
11．重复实验步骤 9 和 10 一次
12．封片
13．即刻在荧光显微镜下进行观察(每个视野计数 200 个细胞)：激发波长 488nm，散发波长 530nm (细胞 膜染色)或 620nm (细胞核染色) ― ―
正常细胞 ――绿色和红色荧光均为阴性
早期细胞凋亡阳性细胞 ――绿色荧光阳性，红色荧光阴性
晚期细胞凋亡阳性细胞 ――绿色和红色荧光均为阳性
二、 间接法
1 ． 准备 1 个 25cm2细胞培养瓶的待测细胞，直至铺满率达 70％(约 100 万细胞数)
2 ． 小心移出细胞培养液到 15 毫升锥形离心管(收集悬浮细胞)
3 ． 加入 xx 毫升 清理液(Reagent A)，覆盖细胞表面
4 ． 小心移出 xx 毫升 清理液(Reagent A) 到 15 毫升锥形离心管(收集洗脱细胞)
5 ． 加入 1 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满细胞表面
6 ． 放进 37℃培养箱孵育 1 分种
7 ． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落
8 ． 加入 3 毫升用户自备的完全细胞培养液
9 ． 移入到 15 毫升锥形离心管(注意：悬浮细胞可以由此步开始)
10．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g
11．小心抽去上清液
12．加入 xx 微升 清理液(Reagent A)，混匀
13．转入到 1.5 毫升离心管
14．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)
15．小心抽去上清液
16．加入 xx 微升 染色工作液
17．用 200 微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群
18．在暗室里室温下孵育 15 分钟
19．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)
20．小心抽去上清液
21．加 xx 微升 反应液(Reagent B)，混匀
22．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)
23．小心抽去上清液
24．加入 xx 微升 反应液(Reagent B)，混匀
25．即刻移取 10 微升在载玻片上压片
26．在荧光显微镜下进行观察(每个视野计数 200 个细胞)：激发波长 488nm，散发波长 530nm (细胞膜染 色)或 620nm (细胞核染色)
27．或即刻进行细胞流式仪分析：波长 488nm 氩离子激光器，观察 50000 个细胞以上
28．建立地形图或散点图以及直方图分析如下
|
| 染色液(Reagent C) | 复染液(Reagent D) |
| 荧光染料 | 异硫氰酸荧光素(FITC) | 碘化丙啶(Propidium iodide；PI) |
| 荧光颜色 | 绿色 | 红色 |
| 阳性意义 | 早期细胞凋亡 | 晚期细胞凋亡 |
| 散发波长 | 530 | 575 (使用 phycoerythrin 的信号检测) |
| 流式仪通道 | FL1 | FL2 |
| 早期凋亡 | 阳性染色 | 阴性染色 |
| 晚期凋亡 | 阳性染色 | 阳性染色 |
| 正常细胞 | 阴性 | 阴性 |
注意事项
1． 本产品为 100 次操作
2． 在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3． 确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞
4 ． 避免使用 EDTA 、EGTA 等钙离子螯合剂处理样品，否则将干扰检测
5 ． 孵育时，必须避免光照
6 ． 建议检测细胞量达 106细胞数为佳
7 ． 用户可以根据情况，适度调整试剂用量
8 ． 建议细胞染色完成后，即刻进行荧光分析，不宜超过 1 小时
9 ． 细胞流式仪分析前，须混匀内容物
10．细胞检测量不得少于 10000 个
11．务必测试正常对照组
12．检测时，须弥补电子补偿，以去除双重参数的光谱重叠
13．正常样品会呈现少量凋亡和死亡细胞，作为检测本底
14．可以使用细胞凋亡诱导剂喜树碱(Camptothecin)作为阳性对照
15．告知流式仪技术员有关细胞类型
16．本公司提供系列细胞凋亡检测试剂产品
质量标准
1 ． 本产品经鉴定性能稳定
2 ． 本产品经鉴定显色清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
| 编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10132 | ANNEXIN V-FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10132A | 清理液(Reagent A) | 500 毫升 |
| G&VS10132B | 反应液(Reagent B) | 100 毫升 |
| G&VS10132C | 染色液(Reagent C) | 5 毫升 |
| G&VS10132D | 复染液(Reagent D) | 5 毫升 |
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10021. 1 | 通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10021.2 | 细胞周期蓝色荧光流式细胞分析试剂盒(紫外波长，无需固定和透膜处理) | 100 次 |
| G&VS10021.3 | 细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE) 红色荧光流式细胞分析试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10022. 1 | 细胞 TUNEL 显色法(DAB) 测定试剂盒 | 10/20 次 |
| G&VS10022.2 | 冰冻切片 TUNEL 显色法(DAB)测定试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10022.3 | 石蜡切片 TUNEL 显色法(DAB)测定试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10022.4 | 细胞 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10022.5 | 冰冻切片 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10022.6 | 石蜡切片 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10091. 1 | 细胞 KUNEL 测定试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10091.2 | 冰冻切片 KUNEL 测定试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10091.3 | 石蜡切片 KUNEL 测定试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10011.2 | 蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10023. 1 | 通用型细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10023.2 | PROPIDIUM IODIDE 细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10023.3 | CHROMOMYCIN A3 细胞核形态染色试剂盒 | 50 次 |
| G&VS10092 | HOECHST 33342 和 PROPIDIUM IODIDE 细胞膜变检测试剂盒 | 50 次 |
| G&VS10032 | TUNEL 流式细胞仪分析试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10042. 1 | 动物细胞/组织细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10042.2 | 植物细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒 | 10 次 |
| G&VS40071 | 石蜡切片组织细胞色素 C 免疫组织化学检测试剂盒 | 10/20 次 |
| G&VS20013 | 细胞调亡 DNA 条带检测试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10046 | G-B 细胞活力和凋亡检测试剂盒 | 50 次 |
| G&VS10051 | ATP 生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒 | 50 次 |
| G&VS10052 | R-G 细胞活力和凋亡检测试剂盒 | 50 次 |
| G&VS10132 | ANNEXIN V－FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒 | 10/20 次 |
| G&VS10136 | Phalloidin－FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10171 | 核抗原－FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒 | 10 次 |
| G&VS10148. 1 | 细胞凋亡诱导(DNA 合成抑制)试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10148.2 | 细胞凋亡诱导(DNA 损伤) 试剂盒 | 20 次 |
| G&VS10148.3 | 细胞凋亡诱导(DNA 酶抑制)试剂盒 | 20 次 |
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