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植物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒产品说明书

发布时间:2026/8/11 9:24:35      阅读次数:19

 

植物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒产品说明书

 

主要用途

植物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂是一种旨在通过有机氮自由基染料DPPH的参与,在抗氧化剂的存在下,通过分光光度仪,观察其峰值下降的变化,来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox总抗氧化能力,即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新新鲜植物组织,包括种子(seed)、叶片(leaf)、根(root)、胚胎叶(cotyledon)、上胚轴(epicotyl)等总抗氧化能力检测。产品严格无菌,即到即用,操作简易,性能稳定。

 

技术背景

超氧自由基阴离子superoxide radical;O2-)、过氧化氢(hydrogen peroxide;H2O2)、羟自由基或氢氧基hydroxyl radical;OH-)、过氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氢过氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion;ONOO-次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的产生和增多,将导致细胞衰老或凋亡,甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内,通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等,大分子,例如白蛋白、铜蓝蛋白(ceruloplasmin;CER)、铁蛋白(ferritin)和抗氧化因子,例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素(bilirubin)等,产生抗氧化能力,即捕获自由基的能力,达到消除或降低ROS的损害。通过稳定的有机氮自由基染料1,1-二苯基-2-三硝基苯肼1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazylradicalDPPH),受到抗氧化剂的去自由基作用,呈现深紫色转化为黄色的变化,衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力,在分光光度仪(515nm波长)的帮助下,观察其峰值下降的变化,并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

 

产品内容

清理液(Reagent A)    毫升

低渗液(Reagent B)    毫升

缓冲液(Reagent C    毫升

染色液AReagent D1     

染色液BReagent D2    毫升

标准液(Reagent E     微升

产品说明书 1份

 

保存方式

保存清理液(Reagent A)低渗液(Reagent B)4冰箱里,其余的保存在-20冰箱里,有效保证6

 

用户自备

15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

2毫升离心管:用于样品操作的容器

1.5毫升离心管:用于裂解悬液存放和标准样品配制的容器

4微型台式离心机:用于样品操作

超声仪:用于破碎植物细胞

200微升1厘米光径比色皿或96孔板:用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪:用于比色分析

 

实验步骤

一、 样品准备

1. 准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定200毫克组织重量

2. 移入到一个液氮冻存管

3. 即刻放进液氮罐过夜

4. 次日从液氮罐里取出,即刻(最快速度)用研磨棒碾碎组织成粉末状(注意:切莫使组织冻融

5. 放进一个15毫升锥形离心管

6. 加入xx毫升4预冷的 清理液(Reagent A)

7. 强力涡旋震荡30秒,充分混匀

8. 转移到4预冷的2毫升离心管

9. 放进4微型台式离心机离心10分钟,速度为400g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)

10. 小心抽去上清液

11. 加入xx毫升4预冷的 清理液(Reagent A),混匀

12. 放进4微型台式离心机离心10分钟,速度为400g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)

13. 小心抽去上清液

14. 重复实验步骤11至13二次

15. 加入xx微升低渗液(Reagent B),混匀

16. 置于200瓦超声仪枪头下,离心管在冰槽里

17. 超声功率为100%,猝击10秒,2个循环

18. 放进4微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g(或10000RPM,例如eppendorf 5415)

19. 移取上清液到新的4预冷的1.5毫升离心管

20. 移取10微升进行蛋白定量检测(建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-G&VS30030.1)

21. 使用清理液(Reagent A)调整蛋白浓度为100微克/10微升

22. 置于冰槽里待测

 

二、标准液准备

1. 准备好5个1.5毫升离心管,标记为1至5号管

2. 分别加入xx微升缓冲液(Reagent C25号管

3. 移取xx微升标准液(Reagent E1号管,混匀

4. 小心移取xx微升1号管的标准液(Reagent E2号管,混匀

5. 小心移取xx微升2号管稀释的标准液(Reagent E3号管,混匀

6. 小心移取xx微升3号管稀释的标准液(Reagent E4号管,混匀

7. 15号管放进冰槽里备用,避免光照;标准管浓度见下表

 

管号

缓冲液(Reagent C

标准液(Reagent E

测定体系

标准 Trolox浓度

1

0

xx微升

xx微摩尔/升

2

xx微升

xx微升

4xx0微摩尔/升

3

xx微升

xx微升

xx微摩尔/升

4

xx微升

xx微升

xx微摩尔/升

5

xx微升

0

0

 

三、 样品测读

实验开始前,将-20冰箱里的试剂置于室温下融化,移取xx毫升染色液B(Reagent D2)1瓶染色液A(Reagent D1)里,混匀,置于暗室里,标记为染色工作液避免光照。然后进行下列操作。

1. 准备1个96孔板,做好标记:空白对照孔、标准样品孔、待测样品孔

2. 分别移取xx微升缓冲液(Reagent C96孔板里的每个孔里

3. 分别加入xx微升染色工作液 

4. 加入xx微升缓冲液(Reagent C空白对照孔

5. 加入xx微升上述配制的标准液(Reagent E到相应标准样品孔里

6. 加入20微升样品(100微克蛋白总量)到待测样品孔里

7. 轻轻摇动96孔板,使其混匀

8. 室温下孵育15分钟

9. 即刻放进酶标仪里测读:515nm波长

10. 分析结果:

1) 构建标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光单位(OD515nm);横座标(X轴)为标准Trolox浓度(微摩尔/升)

2) 空白对照孔为最大吸光单位(OD515nm)读数

3) 标准样品孔和待测样品孔为实际吸光单位(OD515nm)读数

4) 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度(微摩尔/升)

5) 计算样品实际总抗氧化能力

 

 

6) 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力(实际抑制百分率)

 

 

7) IC50:50%抑制率所需的样品单位:TROLOX等值或样品蛋白浓度(毫克/毫升)或样品容量(微升)

 

注意事项

1. 本产品为50次操作,包括标准品

2. 本产品测试范围为10100微摩尔Trolox等值

3. 操作时,须戴手套

4. 样品制备的所有操作均须在4℃状态下进行

5. 用户可以调整标准曲线区间

6. 测试前,样品须新鲜收集

7. 样品须清澈

8. 空白对照孔的吸光读数应为1.0左右为佳

9. 样品读数越低,抗氧化能力越高

10. 可以使用比色皿检测

11. 如果样品抗氧化剂浓度过高或过低, 建议稀释或增加样品容量或浓度

12. 如果测试样品很多,建议使用排枪移液

13. 本公司提供系列抗氧化分析试剂产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定检测敏感

 

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

订购信息

单组分订购信息

编号                                        名称                                                                        规格

G&VS10131.5          植物总抗氧化能力比色法(DPPH)定量检测试剂盒          50次

G&VS10131.5A         清理液(Reagent A)                                                       毫升

G&VS10131.5B          清理液(Reagent B                                                       毫升

G&VS10131.5C          缓冲液(Reagent C                                                       毫升

G&VS10131.5D          染色液AReagent D1                                                 

G&VS10131.5E          染色液BReagent D2                                                  毫升

G&VS10131.5F          标准液(Reagent E                                                        毫升

 

试剂盒订购信息

产品编号

名称

规格

G&VS10053.1

细胞总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50次

G&VS10053.2

组织总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50次

G&VS10053.3

食物总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50次

G&VS10053.4

体液总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50次

G&VS10053.5

植物总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒

50次

G&VS10114.1

细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50次

G&VS10114.2

组织总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50次

G&VS10114.3

食物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50次

G&VS10114.4

体液总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50次

G&VS10114.5

植物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

50次

G&VS10131.1

细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒

50次

G&VS10131.2

组织总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒

50次

G&VS10131.3

食物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒

50次

G&VS10131.4

体液总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒

50次

G&VS10131.5

植物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒

50次

G&VS10476.1

细胞总抗氧化能力(TAC)比色法(FRAP)定量检测试剂盒

50次

G&VS10476.2

组织总抗氧化能力(TAC)比色法(FRAP)定量检测试剂盒

50次

G&VS10476.3

食物总抗氧化能力(TAC)比色法(FRAP)定量检测试剂盒

50次

G&VS10476.4

体液总抗氧化能力(TAC)比色法(FRAP)定量检测试剂盒

50次

G&VS10476.5

植物总抗氧化能力(TAC)比色法(FRAP)定量检测试剂盒

50次

G&VS10477.1

细胞总抗氧化能力(TAC)荧光法(ORAC)定量检测试剂盒

50次

G&VS10477.2

组织总抗氧化能力(TAC)荧光法(ORAC)定量检测试剂盒

50次

G&VS10477.3

食物总抗氧化能力(TAC)荧光法(ORAC)定量检测试剂盒

50次

G&VS10477.4

体液总抗氧化能力(TAC)荧光法(ORAC)定量检测试剂盒

50次

G&VS10477.5

植物总抗氧化能力(TAC)荧光法(ORAC)定量检测试剂盒

50次

 


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