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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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Phalloidin-FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/11 9:37:15 阅读次数：21

Phalloidin-FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒产品说明书

主要用途

Phalloidin-FITC 标记法细胞凋亡检测试剂是一种旨在使用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽 (phalloidin)，探寻细胞骨架的丝状肌动蛋白的变化，来分析特征性早期细胞凋亡状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞(动物、人体、植物等)的细胞凋亡测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞凋亡，或细胞程序性死亡，在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物学过程中，起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。肌动蛋白(actin)是42KD 的球蛋白，构成细胞骨架的微丝(microfilament) 和肌肉收缩装置的细肌丝(thin filament) ，以及细胞膜表面伪足(pseudopodia)和微绒毛(microvilli)。肌动蛋白存在于所有真核生物细胞中，且高度进化保留，参与各种重要细胞功能，包括细胞迁移、细胞分裂、肌肉收缩、细胞形态维护、膜转运(membrane trafficking)等。哺乳动物具有六种异构体，分成α、β、γ三类。球状肌动蛋白(G-actin) 在生理条件下，组合成长丝聚合体，转化为丝状肌动蛋白(F-actin)，形成细胞骨架的微丝。肌动蛋白的聚合与解聚的动态学变化是细胞凋亡的感应标记(sensor )之一，即 F-肌动蛋白聚合增加，转化效率(turnover) 降低，将触发凋亡信号通路。鬼笔环肽(phalloidin)是一种由毒性菇类中分离的二环七肽(bicyclic heptapeptide) 生物碱，与聚合的微丝(F-肌动蛋白) 结合，因此通过异硫氰酸荧光素(FITC) 标记的鬼笔环肽可以体外探测细胞 F-肌动蛋白的分布和含量，据此作为早期细胞凋亡的潜在证据。伴随碘化丙啶(Propidium iodide；PI)的染色以分析DNA含量。借助细胞流式仪，可以清晰探测细胞凋亡的变化。流式细胞术(FLOW CYTOMETRY)是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。

产品内容

清理液(Reagent A)

固着液(Reagent B)

通透液(Reagent C)

封阻液(Reagent D)

染色液(Reagent E)

复染液(Reagent F)

产品说明书

保存方式

保存染色液(Reagent E)和复染液(Reagent F)在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在 4℃冰箱里，避免光照；有效保证 6 月

用户自备

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离

完全细胞培养液(G&VS12052)：用于中和胰蛋白酶的处理

15 毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作

1.5 毫升离心管：用于细胞染色的容器台式离心机：用于细胞收集的操作

微型台式离心机：用于细胞收集的操作

荧光显微镜：用于细胞荧光观察

细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下冻融。移取 xx 微升通透液(Reagent C) 到 1.5 毫升离心管，然后分别加入 xx 微升染色液(Reagent E) 和复染液(Reagent F)，混匀后，标记为染色工作液，置于冰槽里，放进暗室里备用。然后进行下列操作。

一、直接法

1 ．准备 1 个细胞培养 6 孔板，内置 1 个细胞 1 X 1 cm 大小的载玻片

2 ．接种待测细胞培养，直至每孔铺满率达 70％

3 ．小心抽去细胞培养液

4 ．轻轻加上 xx 微升清理液(Reagent A) 到细胞载玻片上，覆盖样品表面

5 ．小心抽去清理液(Reagent A)

6 ．轻轻加上 xx 微升固着液(Reagent B) 到细胞载玻片上，覆盖样品表面

7 ．置于冰槽里孵育 30 分钟

8 ．小心抽去固着液(Reagent B)

9 ．轻轻加上 xx 微升通透液(Reagent C) 到细胞载玻片上，覆盖样品表面

10．小心抽去通透液(Reagent C)

11．轻轻加上 xx 微升封阻液(Reagent D) 到细胞载玻片上，覆盖样品表面

12．室温下孵育 30 分钟

13．小心抽去封阻液(Reagent D)

14．轻轻加上 xx 微升清理液(Reagent A) 到细胞载玻片上，覆盖样品表面

15．小心抽去清理液(Reagent A)

16．重复实验步骤 14 和 15 一次

17．小心加上 xx 微升染色工作液，覆盖样品表面

18．在暗室里室温下孵育 60 分钟

19．小心抽去染色工作液

20．轻轻加上 xx 微升清理液(Reagent A) 到细胞载玻片上，覆盖样品表面

21．小心抽去清理液(Reagent A)

22．封片

23．即刻在荧光显微镜下进行观察(每个视野计数 200 个细胞)：激发波长 488nm，散发波长 530nm (F－肌动蛋白染色)或 620nm (细胞核染色) ― ―

正常细胞 ――绿色荧光图案规则；红色荧光显示细胞核为圆环或椭圆状凋亡细胞 ――绿色荧光强度减弱或消失；红色荧光显示细胞核为分叶状

二、间接法

1 ．准备 1 个 25cm2细胞培养瓶的待测细胞，直至铺满率达 70％(约 100 万细胞数)

2 ．小心移出细胞培养液到 15 毫升锥形离心管(收集悬浮细胞)

3 ．加入 xx 毫升清理液(Reagent A)，覆盖细胞表面

4 ．小心移出 xx 毫升清理液(Reagent A) 到 15 毫升锥形离心管(收集洗脱细胞)

5 ．加入 1 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满细胞表面

6 ．放进 37℃培养箱孵育 1 分种

7 ．轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落

8 ．加入 3 毫升用户自备的完全细胞培养液

9 ．移入到 15 毫升锥形离心管(注意：悬浮细胞可以由此步开始)

10．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

11．小心抽去上清液

12．加入 xx 微升清理液(Reagent A)，混匀

13．转入到 1.5 毫升离心管

14．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)

15．小心抽去上清液

16．加入 xx 微升固着液(Reagent B)，混匀

17．置于冰槽里孵育 30 分钟

18．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)

19．小心抽去上清液

20．加入 xx 微升通透液(Reagent C)，混匀

21．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)

22．小心抽去上清液

23．加入 xx 微升封阻液(Reagent D)，混匀

24．室温下孵育 30 分钟

25．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)

26．小心抽去上清液

27．加入 xx 微升清理液(Reagent A)，混匀

28．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)

29．小心抽去上清液

30．加入 xx 微升染色工作液

31．用 200 微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群

32．在暗室里室温下孵育 60 分钟

33．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)

34．小心抽去上清液

35．加入 xx 微升清理液(Reagent A)，混匀

36．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g (或 1500RPM，例如 EPPENDORF 5415)

37．小心抽去上清液

38．加入 xx 微升清理液(Reagent A)，混匀

39．即刻移取 10 微升在载玻片上压片

40．在荧光显微镜下进行观察(每个视野计数 200 个细胞)：激发波长 488nm，散发波长 530nm (F-肌动蛋白染色)或 620nm (细胞核染色)

41．或即刻进行细胞流式仪分析：波长 488nm 氩离子激光器，观察 50000 个细胞以上

	染色液(Reagent E)	复染液(Reagent F)
荧光染料	异硫氰酸荧光素(FITC)	碘化丙啶(Propidium iodide；PI)
荧光颜色	绿色	红色
阳性意义	早期细胞凋亡	DNA 含量/细胞周期分布
散发波长	530	575 (使用 phycoerythrin 的信号检测)
早期凋亡	荧光减弱	细胞分裂停滞

43 ．建立丝状肌动蛋白双参数散点图(绿色荧光 vs 侧向散射 side scatter)：正常细胞 ――高绿色荧光，低侧向散射

凋亡细胞 ――低绿色荧光，高侧向散射

注意事项

1．本产品为 20 次操作

2．在整个操作过程中须戴手套，以防污染

3．确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞

4 ．孵育时，必须避免光照

5 ．建议检测细胞量达 106细胞数为佳

6 ．用户可以根据情况，适度调整试剂用量

7 ．建议细胞染色完成后，即刻进行荧光分析，不宜超过 1 小时

8 ．细胞流式仪分析前，须混匀内容物

9 ．细胞检测量不得少于 10000 个

10．务必测试正常对照组

11．正常样品会呈现少量凋亡和死亡细胞，作为检测本底

12．可以使用细胞凋亡诱导剂依托泊苷(etoposide)作为阳性对照

13．注意：紫杉醇(PACLITAXEL)或 UV－B 照射诱导细胞凋亡过程中，使 F-肌动蛋白含量增加，荧光增强

14．告知流式仪技术员有关细胞类型

15．本公司提供系列细胞凋亡检测试剂产品

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能稳定

2 ．本产品经鉴定显色清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号	名称	规格
G&VS10136	Phalloidin－FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒	20 次
G&VS10136A	清理液(Reagent A)	100 毫升
G&VS10136B	固着液(Reagent B)	100 毫升
G&VS10136C	通透液(Reagent C)	100 毫升
G&VS10136D	封阻液(Reagent D)	100 毫升
G&VS10136E	染色液(Reagent E)	5 毫升
G&VS10136F	复染液(Reagent F)	5 毫升

产品编号	名称	规格
G&VS10021. 1	通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒	100 次
G&VS10021.2	细胞周期蓝色荧光流式细胞分析试剂盒(紫外波长，无需固定和透膜处理)	100 次
G&VS10021.3	细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE) 红色荧光流式细胞分析试剂盒	100 次
G&VS10022. 1	细胞 TUNEL 显色法(DAB) 测定试剂盒	10/20 次
G&VS10022.2	冰冻切片 TUNEL 显色法(DAB)测定试剂盒	10 次
G&VS10022.3	石蜡切片 TUNEL 显色法(DAB)测定试剂盒	10 次
G&VS10022.4	细胞 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒	10 次
G&VS10022.5	冰冻切片 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒	10 次
G&VS10022.6	石蜡切片 TUNEL 荧光法(Fluorescein)测定试剂盒	10 次
G&VS10091. 1	细胞 KUNEL 测定试剂盒	10 次
G&VS10091.2	冰冻切片 KUNEL 测定试剂盒	10 次
G&VS10091.3	石蜡切片 KUNEL 测定试剂盒	10 次
G&VS10011.2	蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒	100 次
G&VS10023. 1	通用型细胞核形态染色试剂盒	100 次
G&VS10023.2	PROPIDIUM IODIDE 细胞核形态染色试剂盒	100 次
G&VS10023.3	CHROMOMYCIN A3 细胞核形态染色试剂盒	50 次
G&VS10092	HOECHST 33342 和 PROPIDIUM IODIDE 细胞膜变检测试剂盒	50 次
G&VS10032	TUNEL 流式细胞仪分析试剂盒	10 次
G&VS10042. 1	动物细胞/组织细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒	10 次
G&VS10042.2	植物细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒	10 次
G&VS40071	石蜡切片组织细胞色素 C 免疫组织化学检测试剂盒	10/20 次
G&VS20013	细胞调亡 DNA 条带检测试剂盒	10 次
G&VS10046	G-B 细胞活力和凋亡检测试剂盒	50 次

G&VS10051	ATP 生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒	50 次
G&VS10052	R-G 细胞活力和凋亡检测试剂盒	50 次
G&VS10132	ANNEXIN V－FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒	10/20 次
G&VS10136	Phalloidin－FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒	20 次
G&VS10171	核抗原－FITC 标记法细胞凋亡检测试剂盒	10 次
G&VS10148. 1	细胞凋亡诱导(DNA 合成抑制)试剂盒	20 次
G&VS10148.2	细胞凋亡诱导(DNA 损伤) 试剂盒	20 次
G&VS10148.3	细胞凋亡诱导(DNA 酶抑制)试剂盒	20 次