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发布时间：2026/8/11 10:58:34 阅读次数：17
双参数细胞周期G2期流式细胞分析试剂盒产品说明书
主要用途
双参数细胞周期G2期流式细胞分析试剂是一种旨在使用细胞周期素A和DNA含量双重参数在细胞流式仪下，分析和区分细胞周期G2期的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（动物、人体、植物等）的细胞周期G2期分析。广泛用于细胞繁殖，包括细胞衰老、细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料这一单一参数（univariate parameter），借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段，形成三种不同的细胞群，包括G0/G1、S、G2/M。而使用双参数（bivariate parameter），即特异性细胞周期表达蛋白和DNA含量，则可以区分G0和G1，G2和M。其中细胞周期素（cyclins）是细胞周期进程机制的关键元素和标志（landmark）。细胞周期素A（Cyclin A）在细胞周期S中期开始聚集表达，过渡到G2期结束达到高峰，但在M期快速降解，表达阴性，而用于区分G2和M期，同时分析G2期分布情况。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
固着液（Reagent B） 毫升
通透液（Reagent C） 毫升
抗体液（Reagent D） 毫升
染色液（Reagent E） 毫升
复染液（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存固着液（Reagent B）、抗体液（Reagent D）、染色液（Reagent E）和复染液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；抗体液（Reagent D）和染色液（Reagent E）严禁反复冻融；染色液（Reagent E）和复染液（Reagent F），避免光照；有效保证6月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
台式离心机：用于细胞收集的操作
微型台式离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1． 准备1个6孔细胞培养板的细胞（1 X 106细胞/3毫升培养液/孔）
2． 小心抽去细胞培养液
3． 加入xx毫升清理液（Reagent A），铺满培养孔表面
4． 小心抽去清理液（Reagent A）
5． 加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液
6． 放进37℃细胞培养箱孵育1分钟
7． 加入3毫升用户自备的完全细胞培养液
8． 移取细胞混匀液到15毫升锥形离心管
9． 放进台式离心机离心5分钟，速度为400g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5810R）
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
12． 放进台式离心机离心5分钟，速度为400g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5810R）
13． 小心抽去上清液
14． 加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
15． （选择步骤）细胞计数
16． 同时准备1个－20℃预冷的新的15毫升锥形离心管
17． 加入xx毫升－20℃预冷的固着液（Reagent B）
18． 用200微升枪头一滴一滴加入细胞悬液到含有预冷的固着液（Reagent B）里，保持轻度涡旋震荡
19． 置于冰槽里孵育2小时
20． 放进台式离心机离心5分钟，速度为400g（或1500RPM，例如EPPENDORF 5810R）
21． 小心抽去上清液
22． 加入xx毫升预冷的清理液（Reagent A），上下抽吸混匀
23． 转移到1.5毫升离心管
24． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000RPM，例如EPPENDORF 5415D）
25． 小心抽去上清液
26． 用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
27． 加入xx毫升通透液（Reagent C）
28． 涡旋震荡3秒
29． 放进冰槽里孵育20分钟
30． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000RPM，例如EPPENDORF 5415D）
31． 小心抽去上清液
32． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
33． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000RPM，例如EPPENDORF 5415D）
34． 小心抽去上清液
35． 用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
36． 加入xx微升抗体液（Reagent D），充分混匀
37． 放进4℃冰箱里，孵育16小时
38． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000RPM，例如EPPENDORF 5415D）
39． 小心抽去上清液
40． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
41． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000RPM，例如EPPENDORF 5415D）
42． 小心抽去上清液
43． 用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
44． 加入xx微升染色液（Reagent E），充分混匀
45． 室温下孵育60分钟，避免光照
46． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000RPM，例如EPPENDORF 5415D）
47． 小心抽去上清液
48． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
49． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000RPM，例如EPPENDORF 5415D）
50． 小心抽去上清液
51． 用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
52． 加入xx微升复染液（Reagent F），用枪头充分混匀
53． 室温下孵育4小时
54． 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测），避免光照
55． 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光器，观察50000个细胞以上
56． 建立地形图或散点图以及直方图分析
|
| 染色液（Reagent E） | 复染液（Reagent F） |
| 荧光染料 | 异硫氰酸荧光素（FITC） | 碘化丙啶（Propidium iodide；PI） |
| 荧光颜色 | 绿色 | 红色 |
| 散发波长 | 530 | 575（使用phycoerythrin的信号检测） |
| 流式仪通道 | FL1 | FL2 |
| 作用 | Cyclin A的表达 | DNA含量 |
57. 根据地形图或散点图，纵坐标Y轴为FL1（cyclin A绿色荧光），横坐标X轴为FL2（PI红色荧光），分析如下：
1） 根据横坐标X轴的DNA指数（DNA Index；DI）进行区域窗口划分（见参考图）
2） 确定G2/M期区域窗口
3） 计算G2/M期区域窗口的总细胞数
4） 计算G2/M期区域窗口的cyclin A阳性细胞数
5） 获得G2和M期的百分比
6） 获得单个区域窗口的Y轴的cyclin A平均荧光读数
7） 根据cyclin A平均荧光读数，构建G2细胞周期动态变化曲线――纵坐标为cyclin A平均荧光读数，横坐标为时间或药物浓度等
8） 参考图如下：
注意事项
1． 本产品为10次操作量
2． 在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3． 孵育时，必须避免光照
4． 建议不用抗体液（Reagent D），作为阴性对照
5． 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过3天
6． 细胞流式仪分析前，须混匀内容物
7． 细胞检测量不得少于10000个
8． 检测时，须弥补电子补偿，以去除双重参数的光谱重叠
9． 告知流式仪技术员有关细胞类型
10． 本公司提供系列细胞周期检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定标记清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS10137.4 双参数细胞周期G2期流式细胞分析试剂盒 10次
G&VS10137.4A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS10137.4B 固着液（Reagent B） 毫升
G&VS10137.4C 通透液（Reagent C） 毫升
G&VS10137.4D 抗体液（Reagent D） 毫升
G&VS10137.4E 染色液（Reagent E） 毫升
G&VS10137.4F 复染液（Reagent F） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10021.1 | 通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒 | 100次 |
| G&VS10021.2 | 细胞周期蓝色荧光流式细胞分析试剂盒（紫外波长，无需固定和透膜处理） | 100次 |
| G&VS10021.3 | 细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光流式细胞分析试剂盒 | 100次 |
| G&VS10137.1 | 双参数细胞周期G0期流式细胞分析试剂盒 | 10次 |
| G&VS10137.2 | 双参数细胞周期G1期流式细胞分析试剂盒 | 10次 |
| G&VS10137.3 | 双参数细胞周期S期流式细胞分析试剂盒 | 10次 |
| G&VS10137.4 | 双参数细胞周期G2期流式细胞分析试剂盒 | 10次 |
| G&VS10137.5 | 双参数细胞周期M期流式细胞分析试剂盒 | 10次 |
| G&VS10137.6 | 多参数细胞周期全周期流式细胞分析试剂盒 | 10次 |
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