当前位置：首页>技术专栏
发布时间：2026/8/12 15:48:12 阅读次数：26
HOECHST33342/PROPIDIUM IODIDE 简易细胞核形态染色试剂盒产品说明书
主要用途
HOECHST33342/PROPIDIUM IODIDE 简易细胞核形态染色试剂是一种旨在通过荧光染料的细 胞膜差异通透性(differential permeability) 呈现的 DNA 结合性荧光， 来分析细胞核形态、细胞膜损伤与否，进而定性或定量区别活细胞、死细胞(坏死细胞)和凋亡细胞状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞类型(动物、人体、植物、昆虫等) 的观察。 产品严格无菌，即到即用，荧光清晰，操作简捷，性能稳定。
技术背景
赫斯特染料(Hoechst 33342) 为特异性 DNA 活性染料，与 A-T 键结合，其激发波长是350nm，散发波长是460nm，呈现蓝色荧光； 而碘化丙啶(Propidium iodide；PI)为 DNA 碱基嵌入剂，没有碱基结合优先性，其激发波长是 488nm，散发波长是 630nm，呈现红色荧光。根据荧光染料的膜通透性特征：第一，定 性确定细胞膜的损伤状况； 第二，定性或定量区别正常活细胞、死细胞(坏死细胞)、凋亡细胞等。正常活细胞，其胞膜完整，拒绝两种染料进入胞内；死细胞，其胞膜完全破损，可以呈现两种荧光； 凋亡细胞，选择性拒绝碘化丙啶进入，允许赫斯特染料进入，且荧光强度高于正常活细胞。
产品内容
染色液 A (Reagent A)
染色液 B (Reagent B)
产品说明书
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保证 6 月
用户自备
磷酸缓冲液(G&VS12033. 1)：用于清洗样品
1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器
(微型)台式离心机：用于样品操作
荧光显微镜：用于观察细胞荧光染色
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前， 从－20℃冰箱里取出染色液 A (Reagent A)和 染色液 B (Reagent B)， 置入冰槽里融化，避免光照。然后进行下列操作。
一、 贴壁细胞染色
1 ． 准备 1 个细胞培养 48 孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％
2 ． 小心抽去细胞培养液
3 ． 轻轻沿着孔壁加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4 ． 小心抽去磷酸缓冲盐溶液(PBS)
5 ． 小心加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
6 ． 小心加入 xx 微升 染色液 A (Reagent A)
7 ． 轻轻摇动培养板，使其混匀
8 ． 放进 37℃培养箱孵育 10 分钟，避免光照
9 ． 小心抽去染色液
10．即刻置于冰槽里
11．小心加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
12．小心加入 xx 微升 染色液 B (Reagent B)
13．轻轻摇动培养板，使其混匀
14．在冰槽里孵育 10 分钟
15．轻轻沿着孔壁加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
16．小心抽去磷酸缓冲盐溶液(PBS)
17．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：同一视野， 先使用光学显微镜观察细胞位置，然后使用紫外荧光 观察蓝色细胞，最后使用红色荧光，观察红色细胞。按照下表进行分析：
|
| 染色液 A (Reagent A) | 染色液 B (Reagent B) |
| 荧光染料 | HOECHST 33342 | PROPIDIUM IODIDE |
| 荧光参数 | 激发： 350nm；散发： 460nm | 激发： 488nm；散发： 630nm |
| 荧光颜色 | 蓝色 | 红色 |
| 正常活细胞 | 无荧光或低蓝色荧光 | 无荧光 |
| 死亡(坏死) 细胞 | 强烈蓝色荧光 | 强烈红色荧光 |
| 凋亡细胞 | 强烈蓝色荧光 | 无荧光 |
| 膜完整 | 无荧光 | 无荧光 |
| 轻度膜损伤变化 | 蓝色荧光 | 无荧光 |
| 中度膜损伤变化 | 强烈蓝色荧光 | 红色荧光 |
| 重度膜损伤变化 | 强烈蓝色荧光 | 强烈红色荧光 |
二、 悬浮细胞染色
1 ． 将悬浮细胞(1 X 106细胞)移入到 1.5 毫升离心管
2 ． 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
3 ． 小心抽去上清液
4 ． 加入 500 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)，混匀细胞颗粒群
5 ． 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
6 ． 小心抽去上清液
7 ． 加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)，混匀细胞颗粒群
8 ． 加入 xx 微升 染色液 A (Reagent A)，混匀
9 ． 放进 37℃培养箱孵育 10 分钟，避免光照
10．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
11．小心抽去上清液
12．加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)，混匀细胞颗粒群
13．加入 xx 微升 染色液 B (Reagent B)，混匀
14．在冰槽里孵育 10 分钟，避免光照
15．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
16．小心抽去上清液
17．加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)，混匀
18．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
19．小心抽去上清液
20．加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液(PBS)，混匀
21．即刻移取 50 微升在载玻片上压片
22．在荧光显微镜下进行观察：同一视野， 先使用光学显微镜观察细胞位置，然后使用紫外荧光观察蓝色 细胞，最后使用红色荧光，观察红色细胞。按照下表进行分析：
|
| 染色液 A (Reagent A) | 染色液 B (Reagent B) |
| 荧光染料 | HOECHST 33342 | PROPIDIUM IODIDE |
| 荧光参数 | 激发： 350nm；散发： 460nm | 激发： 488nm；散发： 630nm |
| 荧光颜色 | 蓝色 | 红色 |
| 正常活细胞 | 无荧光或低蓝色荧光 | 无荧光 |
| 死亡(坏死) 细胞 | 强烈蓝色荧光 | 强烈红色荧光 |
| 凋亡细胞 | 强烈蓝色荧光 | 无荧光 |
| 膜完整 | 无荧光 | 无荧光 |
| 轻度膜损伤变化 | 蓝色荧光 | 无荧光 |
| 中度膜损伤变化 | 强烈蓝色荧光 | 红色荧光 |
| 重度膜损伤变化 | 强烈蓝色荧光 | 强烈红色荧光 |
23．或转入到细胞流式仪专用测试管，即刻进行细胞流式仪分析：观察 50000 个细胞以上
24．建立地形图或散点图以及直方图分析
|
| 染色液 A (Reagent A) | 染色液 B (Reagent B) |
| 荧光染料 | HOECHST 33342 | PROPIDIUM IODIDE |
| 荧光颜色 | 蓝色 | 红色 |
| 激发波长 | 350 | 488 (使用 phycoerythrin 的信号检测) |
| 流式仪通道 | FL1 | FL2 |
| 正常活细胞 | 低荧光；左下象限 | 低荧光；左下象限 |
| 死亡(坏死) 细胞 | 高荧光；右上象限(也可左上象限) | 高荧光；右上象限(也可左上象限) |
| 凋亡细胞 | 高荧光；右下象限 | 低荧光；右下象限 |
注意事项
1 ． 本产品为 100 次操作
1 ． 操作时须戴手套
2 ． 操作时，避免污染母液
3 ． 确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞；同时要确保足够的细胞数
4 ． 可用 35mm培养皿、 6 孔培养板或 25cm2细胞培养瓶操作，相应增加染色液的用量
5 ． 操作时，须戴手套
6 ． 孵育时，须避免光照
7 ． 建议细胞染色完成后，即刻进行分析
8 ． 细胞流式仪分析前，须混匀内容物
9 ． 细胞流式仪分析，细胞检测量不得少于 10000 个
10．细胞类型不同，对于染色的反应会不同
11．告知流式仪技术员有关细胞类型
12．本公司提供系列细胞核染色分析试剂产品
质量标准
1 ． 本产品经鉴定性能稳定
2 ． 本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS10139. 1 | HOECHST33342 简易细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10139.2 | HOECHST33342/PI简易细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10139.3 | 吖啶橙简易细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10139.4 | PROPIDIUM IODIDE简易细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10139.5 | DAPI简易细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10139.6 | ETHIDIME BROMIDE简易细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10139.7 | 罗丹明 123 简易细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
| G&VS10139.8 | HOECHST33258 简易细胞核形态染色试剂盒 | 100 次 |
上海极威生物科技有限公司 公司地址:上海市崇明县长兴镇潘园公路1800号2号楼9703室
邮箱：435399850@qq.com 电话：021-80186165 手机：16602115336
备案号：沪ICP备15046135号-7
