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酵母细胞周期G1早期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒产品说明书

发布时间:2026/8/12 15:49:43      阅读次数:36

酵母细胞周期G1早期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒产品说明书

 

主要用途

酵母细胞周期G1早期同步(SYNCHRONY)处理试剂是一种旨在使用人工合成的交配信息素α因子多肽抑制作用,产生活体细胞样品同步处于细胞周期G1早期状态的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种酵母细胞,尤其是出芽酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae细胞的细胞周期G1早期同步化处理。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,作用显著。

 

技术背景

细胞周期同步化(cell cycle synchrony)是通过外在的化学处理,使所有或绝大部分细胞处于同一细胞生长周期的特定阶段(G0、G1、S、G2、M等),同步实施相同的生化代谢活动,便于创造参数可控、目标明确的研究条件,来发现内源性或外源性因子产生的细胞变化的关联性,确定药物毒性和药理性的作用靶标。真核细胞的细胞周期分为4个周期:G1(growth 1;生长期1)、S(synthesis;DNA复制)、G2(growth 2;生长期2)、M(mitosis;细胞有丝分裂)期。酵母细胞细胞周期素及其依赖性激酶(cyclin dependent kinase;CDK)复合体调节细胞进入不同周期。其中Cln1、Cln2、Cln3、Clb5、Clb6触发细胞周期开始;Cln1和Cln2促使细胞发芽(budding);Clb5和Clb6启动DNA复制;Clb1和Clb2导致细胞有丝分裂。由此,Cln2为G1期标志,H2A为S期标志,Clb4为G2期标志,而Clb2为M期标志。通过使用不同的抑制剂达到特定周期的阻滞,直至所有细胞同步。G1早期同步处理方法是通过人工合成的交配信息素(mating pheromone)α因子(α-factor)多肽,抑制Cln-cdc28活性,使细胞处于G1早期。

 

产品内容

处理液(Reagent A        

清理液(Reagent B        毫升

产品说明书 1

 

保存方式

保存处理液(Reagent A在-20℃冰箱里,避免反复冻融,密闭瓶盖;其余的保存4℃冰箱里;有效保证3

 

用户自备

1.5毫升离心管:用于样品操作的容器

50毫升锥形离心管:用于样品操作的容器

摇床:用于细胞孵育

超声仪:用于细胞分离

台式离心机:用于样品操作

 

实验步骤

1. 准备1管过夜生长的酵母细胞

2. 移取5毫升到50毫升锥形离心管

3. 加入15毫升用户自备的预热的新鲜培养液,混匀

4. 继续30度下培养,使细胞进入早期指数生长阶段,即细胞达到2至5 X 106细胞/毫升(注意:OD600=0.2-0.3;如果OD600大于0.8重新孵育培养;如果OD600大于0.3至小于0.8之间,稀释到0.2-0.3

5. 5毫升培养体系中,加入xx微升处理液(Reagent A

6. 温和涡旋震荡混匀

7. 继续30温度下孵育60分钟

8. 再次加入xx微升处理液(Reagent A

9. 温和涡旋震荡混匀

10. 继续30温度下孵育60分钟

11. (选择步骤)移取200微升细胞到1.5毫升离心管

12. (选择步骤)超声处理:100瓦功率,10

13. (选择步骤)移取15微升,置于显微镜下观察:大多数细胞呈现特征性shmoos形态 ——细胞处于G1早期

14. 放进台式离心机离心5分钟,速度为4000g

15. 加入xx毫升清理液(Reagent B

16. 温和涡旋振荡混匀

17. 放进台式离心机离心5分钟,速度为4000g

18. 小心抽去上清液

19. 重复实验步骤15至18一次

20. 加入用户自备的的预热的培养液,混匀细胞,并计数,调整细胞到5 X 106细胞/毫升——细胞释放进入细胞周期循环期

21. 继续后续操作,包括细胞流式仪鉴定(注意:建议使用真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE)红色荧光流式细胞分析试剂盒――G&VS10021.4

 

 

注意事项

1. 本产品为10次操作

2. 本产品可以达到75%细胞以上同步出现G1

3. 操作时,须戴手套

4. 操作时,须严格无菌操作

5. 用户可以根据需求,使用不同的培养皿或培养瓶,相应调整试剂用量

6. 处理液(Reagent A的使用比例为1200,即1毫升培养液加入5微升处理液(Reagent A

7. 用户可以根据不同细胞类型,调整不同的处理时间和浓度,以达到最大同步效果

8. 用户可以在细胞阻滞处理终止并释放后,每隔30分钟显微镜下观察细胞出芽状况,以判断细胞进入下一个细胞周期S期的时间点

9. 通常情况下,同步化处理后的细胞周期和时间关系参考如下

处理后时间

细胞周期阶段

0-10分钟

G1早期

30分钟

S

0分钟3小时

同步完成2至3个细胞周期

 10. 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定无细菌、病毒和支原体污染

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

 

订购信息

单组分订购信息

编号           名称                            规格

G&VS10141.2     酵母细胞周期G1早期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒    10

G&VS10141.2A     处理液(Reagent A                     毫升

G&VS10141.2B     清理液(Reagent B                      毫升

  

试剂盒订购信息

 

产品编号

名称

规格

G&VS10021.4

真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE)红色荧光流式细胞分析试剂盒

50

G&VS10021.5

真菌/酵母细胞样品细胞周期SYTOX绿色荧光流式细胞分析试剂盒

50

G&VS10141.1

酵母细胞周期G0期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.2

酵母细胞周期G1早期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.3

酵母细胞周期G1期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.4

酵母细胞周期G1后期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.5

酵母细胞周期S早期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.6

酵母细胞周期S期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.7

酵母细胞周期S后期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.8

酵母细胞周期G2期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.9

酵母细胞周期M期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10141.10

通用型酵母样品细胞周期G1/S和G2/M期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10142

通用型细胞周期同步(SYNCHRONY)细胞流式分析试剂盒

20

 


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