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植物细胞周期S期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒产品说明书

发布时间:2026/8/12 15:55:01      阅读次数:39

植物细胞周期S期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒产品说明书

 

主要用途

植物细胞周期S期同步(SYNCHRONY)处理试剂是一种旨在使蔗糖缺陷和羟基脲双重处理诱导活体细胞样品同步处于细胞周期S期状态权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种代表性植物悬浮细胞(例如拟南芥MM1MM2d、烟草细胞BY-2等)以及转化后细胞的细胞周期S期同步化处理。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,作用显著。

 

技术背景

细胞周期同步化(cell cycle synchrony)是通过外在的化学处理,使所有或绝大部分细胞处于同一细胞生长周期的特定阶段(G0G1SG2M等),同步实施相同的生化代谢活动,便于创造参数可控、目标明确的研究条件,来发现内源性或外源性因子产生的细胞变化的关联性,确定细胞周期特异性基因表达和分子分布,以及细胞结构状况,例如成膜体(phragmoplast)等快速生长的植物细胞的细胞周期分为4个周期:G1growth 1;生长期148小时)、SsynthesisDNA复制;5小时)、G2growth 2;生长期224小时)、Mmitosis;细胞有丝分裂;23小时)期。细胞周期依赖性激酶(cyclin dependent kinaseCDK)复合体调节细胞进入不同周期。通过使用不同的抑制剂达到特定周期的阻滞与释放(arrest and release),直至所有细胞同步。S期同步处理方法是通过蔗糖缺陷和羟基脲(hydroxyurea)双重处理后,核糖核苷酸还原酶(ribonucleotide reductase)活性,从而阻止核糖核苷酸(dNTPs)合成,达到抑制DNA合成,致细胞周期阻滞,使细胞诱导处于S期。

产品内容

清理液(Reagent A     毫升

处理液(Reagent B     毫升

产品说明书                     1

 

保存方式

保存处理液(Reagent B)在-20冰箱里,其余的保存在4冰箱里;有效保证6

 

用户自备

 Murashige & Skoog基础培养基G&VS12323):用于植物细胞培养的营养基

50毫升锥形离心管:用于培养细胞的容器

恒温摇床:用于细胞孵育

20微米尼龙网:用于清洗

小型漏斗:用于清洗的装置

4℃台式离心机:用于样品操作

 

实验步骤

1. 准备120毫升的植物悬浮细胞

2. 转移到50毫升锥形离心管

3. 使用完全MSMurashige and Skoog medium)培养基MS+蔗糖、二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid2,4-D)、呋喃甲基腺嘌呤(kinetin

4. 放进27摇床孵育7天,速度为130RPM(注意:根据细胞特点,采取光照或暗室)

5. 准备1个小型漏斗,内衬20微米尼龙网,置于50毫升锥形离心管上

6. 所有细胞内容液移入到小型漏斗里过滤

7. 加入xx毫升理液(Reagent A清洗过滤5分钟

8. 重复加入xx毫升理液(Reagent A清洗过滤5分钟

9. 转移细胞到新的50毫升锥形离心管

10. 加入xx毫升理液(Reagent A,混匀

11. (替代过滤步骤510)放进台式离心机离心5分钟,速度为400g

12. (替代过滤步骤510)小心抽去上清液

13. (替代过滤步骤510)加入xx毫升理液(Reagent A,混匀

14. (替代过滤步骤510)放进台式离心机离心5分钟,速度为400g

15. (替代过滤步骤510)小心抽去上清液

16. (替代过滤步骤510)重复实验步骤1315一次

17. (替代过滤步骤510)加入xx毫升理液(Reagent A,混匀

18. 移取4毫升悬浮细胞到新的50毫升锥形离心管

19. 加入xx毫升新鲜的清理液(Reagent A

20. 放进27摇床孵育24小时,速度为130RPM(注意:根据细胞特点,采取光照或暗室)

21. 放进台式离心机离心5分钟,速度为400g

22. 小心抽去上清液

23. 加入20毫升用户自备的完全MS培养液

24. 放进27摇床孵育1小时,速度为130RPM(注意:根据细胞特点,采取光照或暗室)

25. 移取4毫升悬浮细胞到新的50毫升锥形离心管

26. 加入16毫升新鲜的完全MSMurashige and Skoog medium)培养基

27. 加入xx微升处理液(Reagent B

28. 放进27摇床孵育18小时,速度为130RPM(注意:根据细胞特点,采取光照或暗室)

29. 准备1个小型漏斗,内衬20微米尼龙网,置于50毫升锥形离心管上

30. 所有细胞内容液移入到小型漏斗里过滤

31. 加入20毫升用户自备的MS基础培养基清洗过滤5分钟

32. 重复次实验步骤31四次

33. 转移细胞到新的50毫升锥形离心管

34. (替代过滤步骤510)放进台式离心机离心5分钟,速度为400g

35. (替代过滤步骤510)小心抽去上清液

36. (替代过滤步骤510)加入20毫升用户自备的MS基础培养基,混匀

37. (替代过滤步骤510)放进台式离心机离心5分钟,速度为400g

38. (替代过滤步骤510)小心抽去上清液

39. (替代过滤步骤510)重复实验步骤3638四次

40. 加入20毫升用户自备的完全MS培养液

41. 放进27摇床孵育2小时,速度为130RPM――细胞进入S

42. 继续后续操作,包括细胞流式仪鉴定(注意:建议使用植物细胞流式细胞仪细胞周期红色荧光分析试剂盒――G&VS10405

 

注意事项

1. 本产品为10次操作

2. 本产品适用于快速生长(倍增时间24小时内),且分散充分的植物悬浮细胞

3. 拟南芥PSB-DT87,以及其它植物悬浮细胞均可使用

4. 本产品可以达到80%细胞以上同步出现S

5. 操作时,须戴手套

6. 操作时,须严格无菌操作

7. 用户可以根据需求,使用不同的细胞用量,相应调整试剂用量

8. 用户可以根据不同细胞类型,采取光照或暗室培养

9. 建议使用过滤清洗为优选

10. 通常情况下,同步化处理后的细胞周期和时间关系参考如下

处理后时间

细胞周期阶段

特征

26小时

S

80%

78小时

G2

 

912小时

M

 

 11. 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定无细菌、病毒和支原体污染

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着信誉至上、客户满意、质量承诺的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORKRECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

 

订购信息

单组分订购信息

编号                         名称                                                                             规格

G&VS10140.6         植物细胞周期S期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒 10

G&VS10140.6A      理液(Reagent A                                                 毫升

G&VS10140.6B      理液(Reagent B                                                 毫升

 

试剂盒订购信息

产品编号

名称

规格

G&VS10140.1

植物细胞周期G0期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.2

植物细胞周期G1早期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.3

植物细胞周期G1期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.4

植物细胞周期G1后期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.5

植物细胞周期S早期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.6

植物细胞周期S期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.7

植物细胞周期S后期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.8

植物细胞周期G2期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.9

植物细胞周期M期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10140.10

通用型植物样品细胞周期G1/SG2/M期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒

10

G&VS10405

植物细胞流式细胞仪细胞周期红色荧光分析试剂盒

20

G&VS10406

植物细胞有丝分裂指数(mitotic indexMI)荧光染色分析试剂盒

20

G&VS10407

植物细胞BrdU标记指数(labeling index)分析试剂盒

10

 


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