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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧（ONOO- ）荧光测定试剂盒产品说明书

发布时间：2026/8/17 11:34:38 阅读次数：19

细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧(ONOO- )荧光测定试剂盒产品说明书

主要用途

细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧(ONOO- ) 荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂XXXX，在细胞氧化条件下，产生绿色荧光，来定量检测细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于一氧化氮代谢、细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子(superoxide radical；O2- )、过氧化氢(hydrogen peroxide；H2O2)、羟自由基或氢氧基(hydroxyl radical；OH- )、过氧化基(peroxyl radical；ROO- )、氢过氧自由基(hydroperoxyl；HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide；NO- )、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion；ONOO- ) 次氯酸(hypochlorous acid；HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species；ROS) 的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。其中过氧亚硝基阴离子是由亚硝酸和过氧化氢反应或超氧阴离子与一氧化氮反应所产生，成为强力氧化剂和硝酸化剂，进而与细胞内的硫氢基(sulphydrils)、金属分子、二氧化碳、酪氨酸残基等目标分子反应，引起细胞，包括DNA和蛋白大分子的损伤，导致各种炎症、血管硬化和神经退行性病变等。作为过氧亚硝基阴离子的特异性荧光探针XXXX，是一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦受到过氧亚硝基阴离子的氧化，便释放出产生强力绿色荧光的XXXX。据此测定细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧族的浓度。

产品内容

清理液(Reagent A)

染色液(Reagent B)

稀释液(Reagent C)

保存液(Reagent D)

产品说明书

保存方式

保存染色液(Reagent B)在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月

用户自备

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离

完全细胞培养液(G&VS12052)：用于细胞操作所需的培养基

15 毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器

1.5 毫升离心管：用于细胞染色的容器

培养箱：用于反应孵育

血细胞计数仪：用于细胞计数

台式离心机：用于沉淀细胞

细胞流式仪：用于细胞荧光分析

(共聚焦)荧光显微镜：用于观察荧光细胞

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于细胞荧光定量分析

实验步骤

一、间接法

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化，

稀释液(Reagent C) 放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出微升染色液(Reagent B) 到新

的 1.5 毫升离心管，加入微升稀释液(Reagent C)，混匀后，标记为染色工作

液，置入暗室里。然后进行下列操作。

1．准备 1 瓶 25cm2细胞培养瓶的待测细胞

2．小心抽去细胞培养液

3．加入毫升清理液(Reagent A) 到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面

4．小心抽去清理液(Reagent A)

5．加入 1 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面

6．置入 37℃培养箱 1 分种

7．振动培养瓶，使细胞脱落

8．加入 4 毫升用户自备的完全细胞培养液

9．移入 15 毫升锥形离心管，充分混匀(注意： 悬浮细胞直接从这一步骤开始)

10．移取 10 微升在血细胞计数仪上进行细胞计数

11．移出 1 X 106细胞到新的 15 毫升锥形离心管

12．放入台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

13．小心抽去上清液

14．加入毫升含有染色液(Reagent B) 和稀释液(Reagent C) 的染色工作液，轻柔混匀

15．放进 37℃恒温水槽孵育 20 分钟，避免光照

16．放入台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

17．小心抽去上清液

18．加入预冷的微升保存液(Reagent D)，轻柔混匀细胞颗粒群

19．放进冰槽里

20．选择下列方式之一进行操作：

a) 即刻进行细胞流式仪分析：波长 488nm 氩离子激光，观察 50000 个细胞以上―― 波峰右移，表明过氧亚硝基阴离子活性氧族(ONOO- ) 含量高

b) 或使用(共聚焦)荧光显微镜观察(定性检测)： 1)移取 10 微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片 2)激发波长 480nm 或 500nm，散发波长 530nm――

绿色荧光增强，表明过氧亚硝基阴离子活性氧族(ONOO- )含量高

c) 或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测(定量检测)：

1)移取 400 微升上述细胞悬液到 1 毫升比色杯

2)加入微升保存液(Reagent D)

3)上下倾倒混匀数次

4)放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发波长 480nm 或 500nm，散发波长 530nm―― RFU增高，表明过氧亚硝基阴离子活性氧族(ONOO- ) 含量高

二、直接法

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化，

稀释液(Reagent C) 放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出微升染色液(Reagent B) 到新

的 1.5 毫升离心管，加入微升稀释液(Reagent C)，混匀后，标记为染色工作

液，置入暗室里。然后进行下列操作。

1．准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％

(注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿， 35mm 培养皿，和其它培养孔板，见注意事项4)

2．小心抽去细胞培养液

3．小心沿着孔壁加入微升含有染色液(Reagent B) 和稀释液(Reagent C) 的染色工作液到 1 个细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4．放进 37℃细胞培养箱里孵育 20 分钟

5．小心抽去含有染色工作液的细胞培养液

6．小心沿着孔壁加入 500 微升 37℃预热的保存液(Reagent D) 到细胞培养孔

7．选择下列方式之一进行操作：

(A) 使用倒置荧光显微镜观察(定性检测)：

激发波长 480nm或 500nm，散发波长 530nm―― 绿色荧光增强，表明过氧亚硝基阴离子活性氧族 (ONOO- )含量高

(B) 使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测(定量检测)：

激发波长 480nm或 500nm，散发波长 530nm――RFU增高，表明过氧亚硝基阴离子活性氧族(ONOO- ) 含量高

注意事项

1 ．本产品为 20 次操作

2 ．操作时，须戴手套

3 ．孵育时，必须避免光照

4 ．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿， 35mm 培养皿，和各种培养孔板，须相应调整操作用量：

操作容器	操作用量
载玻片	100 微升
载玻片培养皿	1 毫升
35mm 培养皿	1 毫升

96 孔培养板	100 微升
48 孔培养板	200 微升
24 孔培养板	500 微升
12 孔培养板	1 毫升
6 孔培养板	2 毫升
25cm2细胞培养瓶	3 毫升

5 ．根据细胞类型，调整染色工作液使用剂量(1：200 至 1 ：1000 容量比)，避免过度染色

6 ．建议细胞染色完成后，即刻进行细胞荧光分析

7 ．可以使用 2.5 微摩尔尿酸或 25 微摩尔半胱氨酸(cysteine)，观察细胞荧光减弱或消失现象现象

8 ．本公司提供过氧亚硝基阴离子解构剂和清除剂溶液

9 ．用户可以使用可见光分光光度仪检测，波长为 500nm

10．本公司提供系列过氧亚硝基阴离子活性氧分析试剂产品

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能稳定

2 ．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号	名称	规格
G&VS10149. 1	细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧荧光测定试剂盒	20 次
G&VS10149. 1A	清理液(Reagent A)	500 毫升
G&VS10149. 1B	染色液(Reagent B)	1 毫升
G&VS10149. 1C	稀释液(Reagent C)	100 毫升
G&VS10149. 1D	保存液(Reagent D)	100 毫升
G&VS12024	胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液	100/500 毫升
G&VS12024	DMEM 完全细胞培养液	500 毫升

产品编号	名称	规格
G&VS10149. 1	细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧(ONOO- )荧光测定试剂盒	20 次
G&VS10149.2	冰冻切片过氧亚硝基阴离子活性氧(ONOO- )荧光测定试剂盒	20 次
G&VS10149.3	活体组织过氧亚硝基阴离子活性氧(ONOO- )荧光测定试剂盒	20 次
G&VS10149.4	真菌/酵母细胞内过氧亚硝基阴离子活性氧(ONOO- )荧光测定试剂盒	20 次
G&VS10149.5	植物过氧亚硝基阴离子活性氧(ONOO- ) 荧光测定试剂盒	20 次
G&VS10149.6	体液过氧亚硝基阴离子活性氧(ONOO- ) 荧光测定试剂盒	20 次
G&VS12298	过氧亚硝基阴离子解构剂 FeTMPyP pentachloride	1 毫升
G&VS12299	过氧亚硝基阴离子清除剂硫化乙醇胍琥珀酸钠(Mercaptoethylguanidine sodium succinate)	1 毫升